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背景皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma, cSCC)是人类头面部和生殖器最常见、危害最大的皮肤恶性肿瘤之一,约占非黑素性皮肤肿瘤的20%。常规手术、激光、放疗等可直接去除或破坏肿瘤组织,但这些方法存在组织结构破坏性大、易复发、复发后再次治疗困难等问题。由于SCC免疫原性弱,宿主免疫功能缺陷或低下无法诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫应答,是SCC复发和转移的主要原因。因此,增强肿瘤的免疫原性恢复肿瘤抗原激发机体抗肿瘤免疫反应的能力成为治疗肿瘤的有效免疫疗法之一。光动力治疗(Photodynamic Therapy, PDT)是光敏剂聚集于增生旺盛的组织(如肿瘤组织等),用相应波长的光源局部照射,激发光化学反应导致病变组织破坏的治疗方法。PDT不仅能直接杀伤肿瘤细胞、损伤肿瘤脉管系统,而且能产生较多的肿瘤抗原性物质(如HSP70、高迁移率蛋白等)诱导机体产生抗肿瘤免疫应答。课题组前期实验发现ALA-PDT后的肿瘤组织局部DC、CD4+T细胞、CD8+T细胞明显增多,且有较多的炎症细胞浸润和TNF-α, IL-1β, IL-6等炎症介质表达上调。树突状细胞(dendritic cell, DC)是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞,是连接适应性免疫应答和固有免疫应答的桥梁,在免疫系统中有着不容忽视的作用。正常情况下,DC表现为未成熟状态,摄取抗原及迁移能力较强,当受到肿瘤抗原等刺激以后,DC被诱导成熟,递呈抗原的能力显著增强,将加工处理过的肿瘤抗原肽-复合物递呈给T细胞,从而启动宿主的抗肿瘤免疫应答。研究表明,肿瘤抗原肽等体外冲击DC,形成DC疫苗后可诱导机体产生抗肿瘤免疫。有报道称肿瘤细胞裂解物与DC共培养制成的DC疫苗能特异性诱导机体产生细胞毒性T细胞反应,从而对肿瘤产生治疗作用并有效预防肿瘤的发生。目的研究ALA-PDT处理的PECA细胞裂解物诱导原代培养的小鼠骨髓来源的DC成熟情况,并进一步探讨体外ALA-PDT处理的PECA细胞裂解物冲击DC所制备的PDT-DC疫苗预防皮肤鳞癌的疗效及作用机制。方法(1)皮肤鳞癌ALA光动力DC疫苗制备：原代培养SKH-1无毛小鼠骨髓来源DC,以0.5J/cm2的ALA-PDT处理PECA,将得到的细胞裂解物与DC共培养,倒置显微镜及透射电镜观察DC形态,流式细胞术检测DC表面分子CD80、 CD86及MHC-Ⅱ;(2)皮肤鳞癌ALA光动力DC疫苗预防皮肤鳞癌的疗效观察：取50只小鼠,分为5组,将PDT-DC疫苗、PDT-PECA瘤苗、F/T-DC疫苗及培养基分别免疫小鼠三次后7天,在小鼠对侧背部皮下注射活PECA细胞,观察小鼠肿瘤生长情况,计算各组小鼠成瘤率,每天测量小鼠体积及体重,观察皮肤鳞癌ALA光动力DC疫苗预防皮肤鳞癌的作用；(3)皮肤鳞癌ALA光动力DC疫苗预防皮肤鳞癌的机制研究：注射活PECA细胞7天后,HE及免疫组化检测局部CD4+T、CD8+T及Treg细胞浸润情况,流式细胞术检测脾细胞中CD4+T、CD8+T及Treg细胞的比例,ELISA检测小鼠外周血IFN-γ, IL-12及IL-10的表达情况。结果(1)0.5J/cm2的ALA-PDT处理PECA所得的细胞裂解物能够诱导原代培养的DC形态成熟,同时使得DC表面的CD80、CD86及MHC-Ⅱ类分子表达上调；(2)免疫小鼠三次,并在小鼠对侧背部注射PECA细胞后,PDT-DC疫苗组小鼠未形成肿瘤,PDT-PECA瘤苗、F/T-DC疫苗及肿瘤对照组小鼠的成瘤率分别为50%、90%及100%,所形成的肿瘤体积及老鼠的质量随时间的延长而增加；(3)免疫组化结果示：PDT-DC疫苗局部的CD4+T及CD8+T细胞均为阳性,而其余对照组为阴性,所有实验组的局部Treg细胞均未见明显阳性；PDT-DC疫苗组脾细胞中CD4+T及CD8+T细胞比例高于其他对照组,Treg细胞比例低于其他对照组；外周血中IFN-γ及IL-12高于其他对照组,而IL-10则低于其他对照组。结论0.5J/cm2的ALA-PDT处理的PECA细胞裂解冲击DC所制备的PDT-DC疫苗能预防皮肤鳞癌的发生。