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植物内生真菌是一类重要的真菌资源,是植物微生物系统中的天然组成成分,在生态系统的循环过程中扮演着重要的角色。马比木是一种重要的药用植物,含有重要药用成分喜树碱,其内生真菌作为新的药物资源受到了广泛关注。本研究以贵州省的马比木为研究对象,分别采集贵阳市修文县、铜仁市万山区与遵义市播州区三个地区四个季节的不同组织部位马比木样本,进行马比木内生真菌的分离纯化及生物学鉴定,进而对贵州省马比木的内生真菌的多样性进行评价。从1444个马比木组织块中,分离出1037株内生真菌,隶属于子囊菌门的3个纲,9个目,31个属。其中从贵阳市修文县分离的菌株656株,其中春季151株,夏季114株,秋季247株,冬季144株;铜仁市万山区分离得到的菌株有223株,遵义市播州区则有258株,共1037株菌。分别提取纯化菌株的ITS rDNA,采用通用引物ITS1/ITS4对ITS基因片段进行PCR扩增测序,通过BLAST搜索相关序列,再进行系统发育分析,结合序列碱基相似性的比对来确定马比木内生真菌的分类地位。通过分子生物学鉴定,其中58.1%(18/31)的属分布于座囊菌纲(Dothideomycetes),32.3%(10/31)的属分布于粪壳菌纲(Sordariomycetes),9.68%(3/31)的属分布于散囊菌纲(Eurotiomycetes)。优势属为间壳座属Diaporthe,分离的菌株数为679株,超过了总数的一半,其分离率与分离频率分别达到40.24%与57.58%。其次是刺盘孢属Colletotrichum、叶点霉属Phyllosticta,但比例都不高。在分离到的31个属的内生真菌中,通过多种促产孢方式对菌株进行刺激,有13个属的产孢结构及孢子形态被观察到,分别为Colletotrichum、Alternaria与Fusarium,Bipolaris、Periconia、Zasmidium、Phyllosticta、Hypoxylon、Cercophora、Australiasca、Penicillium和Aspergillus。从不同季节上来看,各个季节的内生真菌的分布是有所差异的。分离内生真菌数量最多的是秋季,且秋季的多样性指数与辛普森指数也高于其他三个季节。从不同地区上来看,贵阳的定殖率最高,而铜仁市万山区的分离率最高,三个地区均有自己单独分离得到的属种,贵阳市、铜仁市各有7个,遵义市只有2个。贵阳市修文县马比木组织块分离到的内生真菌的多样性指数、辛普森指数与均匀度指数都是最高的,铜仁市马比木内生真菌的丰富度最高。此外,茎的定殖率与分离率都高于叶,而叶片的多样性指数、辛普森指数与丰富度指数都明显的高于茎及其他组织部位。另外,马比木特定组织中有其单独分离得到的属种,具有强的宿主组织专一性。