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1、背景和目的：脑在缺血一定时间并恢复血液灌流后,出现损伤加重的矛盾现象,称为脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury, CI/R)。脑缺血/再灌注损伤涉及多种机制,氧化应激是其中重要机制之一。氧化应激是指机体活性氧(ROS)产生过多和/或抗氧化能力降低,使得ROS在细胞内大量蓄积而引起的组织细胞氧化损伤过程。丹参多酚酸盐是中药丹参的水溶性提取物,其中丹参乙酸镁是其主要药理活性成分。有文献报道,丹参乙酸镁能够有效保护脑缺血/再灌注损伤,这种保护作用与抗氧化应激有关,但是其机制尚不清楚。机体内生成ROS的酶系很多,而NADPH氧化酶(NOX)来源的ROS在心血管系统疾病中的作用最受关注。我们课题组前期工作已经证实脑内NADPH氧化酶NOX2、NOX4亚型水平变化与脑缺血/再灌注氧化损伤密切相关。亦有文献报导丹参乙酸镁可以抑制内皮细胞内NADPH氧化酶活性,丹参多酚酸盐的抗脑缺血/再灌注氧化损伤保护作用是否与抑制NADPH氧化酶的表达有关?尚未见报道。基于文献报道和课题组前期工作,本研究将利用大鼠脑缺血/再灌注损伤模型和神经细胞低氧/复氧损伤模型,探讨丹参多酚酸盐及其主要成分丹参乙酸镁对脑缺血/再灌注氧化损伤的作用及其对NOX2、 NOX4表达和活性影响。2、方法：动物实验,采用脑中动脉阻断(MCAO)法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型。第一部分,探讨丹参多酚酸盐抗脑缺血/再灌注损伤量效关系,雄性大鼠随机分成8组：①正常对照组(Control组)；②假手术组(Sham组)；③脑缺血/再灌注组(I/R组)；④丹参多酚酸盐注射液(2mg/kg)+脑缺血/再灌注组(I/R+2mg/kg);⑤丹参多酚酸盐注射液(10mg/kg)+脑缺血/再灌注组(I/R+10mg/kg);⑥丹参多酚酸盐注射液(25mg/kg)+脑缺血/再灌注组(I/R+25mg/kg);⑦丹参多酚酸盐注射液(50mg/kg)+脑缺血/再灌注组(I/R+50mg/kg);⑧溶媒+脑缺血/再灌注组(I/R+溶媒组)。采用Bederson评分法对大鼠神经学功能进行评分,TTC染色观察并计算梗死灶体积。第二部分,探讨丹参多酚酸盐抗脑缺血/再灌注损伤机制,雄性大鼠,随机分成7组：①正常对照组(Control组)；②假手术组(Sham组)；③脑缺血/再灌注组(I/R组)；④丹参多酚酸盐注射液+脑缺血/再灌注组(I/R+SMPS组)；⑤丹参乙酸镁+脑缺血/再灌注组(I/R+MLB组)；⑥依达拉奉+脑缺血/再灌注组(I/R+edaravone组)；⑦溶媒+脑缺血/再灌注组(I/R+vehicle组)。采用Bederson评分法对大鼠神经学功能进行评分,TTC染色观察并计算梗死灶体积,HE染色观察病理组织形态学特点,DNA缺口末端原位标记(TUNEL)染色观察细胞凋亡,收集各组动物脑组织,比色法测定脑中H202的含量、Caspase-3活性,收集脑组织并提取RNA和蛋白,测定NOX2、NOX4的mRNA及蛋白水平。细胞实验,采用神经细胞低氧无糖/复氧(OGD/R)模型,NG108-15神经细胞分为6组：①正常对照组(control组)；②低氧无糖／复氧模型组(OGD/R组)；③丹参乙酸镁+低氧无糖/复氧组(OGD/R+MLB组)；④依达拉奉+低氧无糖/复氧组(OGD/R+edaravone组)；⑤AS2870+低氧无糖/复氧组(OGD/R+VAS2870组)；⑥溶媒组+低氧无糖/复氧组(OGD/R+vehicle组)采用Hoechst染色法观察神经细胞凋亡,检测培养液中LDH含量,细胞内NADPH氧化酶活性以及H202水平。3、结果：(1)与对照组相比,脑缺血/再灌注组大鼠死亡率显著升高,并伴随明显的神经学功能缺陷和脑梗死灶,这些现象可以被丹参多酚酸盐(>10mg/kg)显著减轻。(2)与对照组相比,脑缺血/再灌注组大鼠脑组织排列较为疏松,神经细胞变性、坏死,胞核固缩,核仁消失,细胞间隙出现较大的空腔。在给予丹参多酚酸盐处理后,虽然也有神经元变性、坏死,核固缩成长条形等现象,但数量和程度均较脑缺血/再灌注组明显减少,细胞间隙空腔明显减小。(3)对比正常对照组,TUNEL阳性细胞数和Caspase-3活性在脑缺血/再灌注组大鼠脑组织中显著增加,丹参多酚酸盐干预后,凋亡细胞数和Caspase-3活性显著下降。(4)与正常组相比,脑缺血/再灌注组大鼠脑组织中NOX2, NOX4的mRNA及蛋白表达水平明显上调,H202含量显著增加,这些变化均被丹参多酚酸盐减弱。(5)与正常组相比,OGD/R组神经细胞凋亡率明显升高,LDH释放增加,而给予丹参乙酸镁后,可明显减轻细胞的凋亡与坏死。(6)与正常组相比,OGD/R组细胞内NADPH氧化酶活性以及H202水平明显增加,丹参乙酸镁可以明显抑制这些现象。4、结论：丹参多酚酸盐具有抗脑缺血／再灌注氧化损伤的作用,其机制可能与抑制NOX2、NOX4的表达从而降低缺血／再灌注诱导的氧化应激有关。