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鸭源性IBVZZ2004是从以生长和免疫抑制为主要症状的病鸭体中分离到的一株病毒,该毒株对鸡和鸭都有致病性。本研究进行了IBVZZ2004株S1和M基因在sf9昆虫细胞中的表达,并检测了表达蛋白的抗原性,为进一步研究这两种蛋白的生物功能及基因工程疫苗奠定基础。根据IBVZZ2004株病毒的全基因序列,对S1和M基因序列进行分析,分别设计出S1和M基因的特异性引物;采用RT-PCR方法扩增出S1和M基因,经琼脂糖电泳鉴定得到大小约1.6kb和700bp的片段,与预期结果一致。用限制性内切酶分别对S1、M基因和转移载体pFastBacHTA进行双酶切,酶切后分别回收,于16℃水浴锅中连接过夜,将连接产物转化大肠杆菌DH5感受态细胞,构建重组转移载体。经酶切、PCR和序列测定鉴定正确后,将重组转移载体pFastBacHTA-S1和pFastBacHTA-M分别转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑法筛选出阳性重组Bacmid,经PCR鉴定证明成功构建了重组穿梭载体Bacmid-S1和Bacmid-M;将Bacmid-S1和Bacmid-M分别进行3次纯化培养后,再分别转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,收获重组杆状病毒及病变细胞,检测S1和M基因的表达;经SDS-PAGE和Western-blot检测获得大小约64kDa和31kDa的特异性蛋白条带,免疫荧光检测Bacmid-S1和Bacmid-M感染的细胞均有特异性荧光。研究结果表明鸭源性IBVZZ2004的S1和M基因在sf9昆虫细胞中均获得了成功表达,所表达的S1蛋白和M蛋白均具有抗原活性,可以作为免疫检测抗原。