【摘 要】
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大肠杆菌表达系统具有成本低、蛋白表达量高,容易纯化等优点,因此利用大肠杆菌表达L1嵌合蛋白,并在体外组装成cVLP将为研制HPV疫苗提供一种新的方法.该文首先利用PCR的方法扩
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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大肠杆菌表达系统具有成本低、蛋白表达量高,容易纯化等优点,因此利用大肠杆菌表达L1嵌合蛋白,并在体外组装成cVLP将为研制HPV疫苗提供一种新的方法.该文首先利用PCR的方法扩增出3末端缺失90bp(30个氨基酸)的HPV16L1基因编码序列,命名为L1ΔC30.同时扩增出HPV16 E7基因5端150bp（50个氨基酸）的编码序列,命名为E750.将E750和L1ΔC30拼接后形成嵌合基因,经测序表明嵌合基因与设计的序列相符,读码框架正确.该嵌合基因插入到原核表达载体pGEX-2T中,获得表达GST融合蛋白的重组质粒pGEXL1Δ30E750,并在大肠杆菌JM109中成功表达.综上所述,我们的实验结果表明,利用大肠杆菌系统可以高效表达HPV16型L1/E7嵌合蛋白,经过亲和层析和分子筛可以得到纯的嵌合蛋白,在合适的条件下,纯的嵌合蛋白可以在体外组装成为cVLP,这为进一步研制HPV疫苗提供了一种极有价值的新方法,同时为下一步该种方法得到cVLP的免疫效果的研究打下了良好的基础.
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