抗癌药物口服是目前国内外医药界共同关注的科学难题，为了研究药物在小肠内的吸收，本文建立了Caco-2细胞单层模型模拟小肠，制备了长春碱纳米微粒，并对其在Caco-2单层的吸收过程进行了深入的研究。 1 Caco-2细胞单层模型的建立与验证 为了研究建立Caco-2细胞模型的方法，并确认Caco-2细胞模型的正常生长特性，以在日常培养中进行监控，我们把Caco-2细胞常规培养条件下，以8×10<4>个/mL的接种密度接种于Millicell插入式培养皿中，培养21天后可用于药物跨膜转运实验。用光镜、电镜、细胞密度测定等方法检查细胞的形态学特点及生长特点，测定碱性磷酸酶活性、跨膜电阻、荧光素钠透过量以验细胞单层的极化现象和致密程度。Caco-2细胞单层在生长10天以后均匀、致密，21天后微绒毛、碱性磷酸酶、紧密连接等呈不对称分布，跨膜电阻达到600 Ω·cm<2>，荧光素钠透过量为0.52％h<-1>cm<-2>，而同样条件下空白膜的透过量大于30％h<-1>cm<2>。结果表明本培养条件下，Caco-2细胞单层形态与小肠上皮细胞类似，跨膜电阻、标志物透过量均达到要求，可以作为研究小肠药物转运过程的体外模型。 2 负载长春碱的PCL-PEG-PCL纳米粒的制备与表征 采用封管聚合的方法，以辛酸亚锡为催化剂，130℃条件下制备了PCL-PEG6000-PCL三元共聚物。并在温和的条件下采用共沉淀法获得负载有长春碱的PCL-PEG6000-PCL纳米粒。三元共聚物高分子数均分子量为50000左右。纳米粒用动态光散射(DLS)和透射单子显微镜来表征。结果表明所得纳米粒呈规则的核(PCL)一壳(PEG)球形结构，粒经为185±2.7nm，Zeta电位为-6.7mV，药物负载率和包覆率较高分别为28.83％和86.52％。体外释放研究表明，该纳米粒在3h内释放出总药量的30.46％,72h内几乎全部药物被释放出，体现了长循环的功能。 3 负载长春碱的PCL-PEG-PCL纳米粒在Caco-2细胞单层的吸收特性研究 考察了硫酸长春碱和负载长春碱的纳米粒的浓度对它们在Caco-2细胞单层的转运的影响。在80～240μM的浓度范围内，硫酸长春碱及其纳米粒在Caco-2细胞单层AP-BL方向的转运并无浓度依赖性或者饱和的现象。AP-BL转运的表观渗透系数Papp在整个浓度范围内并无明显变化，因此可以判断转运过程是被动转运机制。还发现，在80～240μM的浓度范围内，AP-BL方向上，负载长春碱的纳米粒的表观渗透系数Papp(Nvbl)比Papp(vbl)增加了6～10倍，由此可以判断，将硫酸长春碱经过纳米粒的负载后，AP-BL转运增加明显，纳米粒对长春碱有显著的促吸收效果。这是因为负载纳米粒的长春碱的转运是由胞饮作用和在转运介质中释放出的长春碱单体的胞间转运共同作用实现的，并且给药过程并没有破坏细胞单层。