利用酵母双杂交系统筛选与ARIP5相互作用的蛋白质

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激活素属于转化生长因子β超家族,是一种多功能生长分化因子,其作用具有明显的组织特异性。在激活素的信号转导通路中,由于Smads家族蛋白无法解释激活素作用的组织特异性,从而开始研究激活素受体相互作用蛋白(ARIPs)的作用。ARIPs的成员ARIP1-5在其N端均可以与激活素Ⅱ型受体发生作用,因此要研究激活素的不同信号通路的关键就在于其C端作用的阐明。酵母双杂交系统是检测蛋白质与蛋白质之间相互作用发生与否的行之有效的一种实验手段。为了进一步研究ARIP5在激活素细胞信号转导中的作用,我们利用酵母双杂交系统,以pGBK-ARIP5作为“诱饵”质粒,对cDNA表达文库进行了筛选,得到了 50个阳性克隆,从阳性克隆的酵母菌株中提取质粒并转化大肠杆菌TOP10,之后在含氨苄青霉素的抗性平板上筛选,对阳性克隆的插入片段进行测序并将测序结果分析。应用酵母双杂交系统筛选到的与ARIP5相互作用的蛋白,可以完善激活素的信号转导通路的网络,从而为进一步研究激活素的功能提供理论依据,并为与激活素有关的疾病的治疗提供一条新的途径。
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