2003年底至今,东南亚地区持续爆发H5N1禽流感疫情,并随着侯鸟迁移不断扩散至欧洲、非洲等地区,引起大规模禽类感染和散在的人感染事件。长期的监测结果表明,H5N1型病毒由于其变异快速、致病性强,能够感染人类,最有可能成为流感大流行的候选株。目前,检测H5亚型禽流感病毒的快速诊断试剂尚无大规模商品化的产品出现,现有的诊断方法难以满足对禽流感疫情的及时发现和控制的需要。本研究致力于研制出一种特异性针对H5N1禽流感病毒血凝素抗原的快速诊断试剂盒,并对其进行全面的性能评估。本实验室在H5亚型禽流感病毒单抗制备方面已有多年经验,利用分子进化树手段分析近年来在东南亚地区流行的H5N1禽流感病毒株的HA1基因序列的进化规律,选择了以A/Ck/HK/Yu22/02(H5N1)为主的共14株代表性毒株作为抗H5亚型单抗盘制备的免疫原,最终获得了476株抗H5亚型血凝素单抗,并且对全部单抗的性质做了鉴定。这些前期工作为诊断试剂的研制奠定了坚实的基础。基于上述基础,本研究通过对单抗的进一步筛选挑选了4株单抗(1A6、13H8、2F10和6B7)研制出了一种特异性检测H5N1禽流感病毒血凝素抗原的快速诊断试剂盒,建立了试剂盒的生产工艺,并对其进行了大规模的性能评估。临床评估结果表明,H5-Dot对培养病毒的检测灵敏度为100%(85/85),特异性为100%(61/61);检测现场标本的灵敏度为77.3%(92/119),特异度为99.2%(20/2527)。H5-Dot对H5N1病毒培养液的检测下限约相当于4×10~7病毒拷贝(4×106～5×108),分析灵敏度约比甲型流感诊断试剂QuickVue A+B高25倍、比另外一种甲型流感诊断试剂Directigen试剂高8倍。上述结果提示,H5-Dot具有较好的检测性能,能够满足流感疫情的监控需要。