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本研究以乌鳢为试验对象,主要探究豆粕替代鱼粉对乌鳢生长性能,肠道菌群结构和肠道健康的影响。首先通过检测野生乌鳢肠道中的菌群结构,确定肠道中的优势群落;其次通过培养乌鳢肠道中的好氧菌株,并测定其产蛋白酶能力,来评价豆粕对乌鳢肠道内好氧菌组成和产蛋白酶能力的影响;最后通过研究豆粕对乌鳢肠道菌群和肠道健康的影响,探究饲料中豆粕、肠道菌群和肠道健康之间的关系。试验一:为分析乌鳢(Channa argus Cantor,1842)不同胃肠道部位(胃,前肠,中肠和后肠)中的微生物群落,使用PCR技术和16S rDNA测序技术,在胃,前肠,中肠和后肠中分别检测到194、140、212和122个操作分类单元(OTUS)。结果显示,各部位之间肠道微生物的Sobs,ACE,Shannon和Simpson指数之间存在显著差异(P<0.05)。在门水平上,乌鳢的胃肠道微生物群落主要由变形菌门组成,其中包括盐单胞菌属,希瓦氏菌属,邻单胞菌属和鞘氨醇单胞菌属。同时还有梭杆菌门,厚壁菌门和拟杆菌门。四个部位之间的微生物群落组成存在显著差异(P<0.05)。在中肠和后肠中,蓝菌门和螺旋菌门数量显著上升(P<0.05)。在后肠和前肠中,梭杆菌门和厚壁菌门分别为优势菌群(P<0.05)。变形菌门在后肠中含量最低(P<0.05)。在属水平上,后肠中的鲸杆菌属和邻单胞菌属显著高于其他三个部位(P<0.05)。梭菌属和普氏菌属在中肠中最高(P<0.05)。盐单胞菌属,希瓦氏菌属和鞘氨醇单胞菌属在前肠中最高(P<0.05)。副球菌属和弧菌属在胃中最高。有些属仅在某些部位被检测到,如,仅在胃中检测到副球菌属和弧菌属;仅在前肠中检测到盐单胞菌属,希瓦氏菌属和鞘氨醇单胞菌属;仅在中肠中检测到梭菌属和普氏菌属;仅在后肠中检测到鲸杆菌属和邻单胞菌属(P<0.05)。在种水平上,仅在胃中检测到根状不动杆菌,在前肠和中肠分别未检出普氏杆菌和产气荚膜梭菌,而在后肠未检出普氏杆菌和粪杆菌。试验二:本试验通过分离和培养乌鳢肠道内的产蛋白酶好氧菌株,同时用平板培养法测定其产蛋白酶能力,来探究饲料中豆粕替代部分鱼粉对乌鳢肠道内好氧菌的组成及产蛋白酶能力的影响。首先配制对照组(D1组)饲料,对照组饲料以脱脂鱼粉为主要蛋白源,饲料中添加55%的鱼粉;然后配制2种试验组饲料,用豆粕分别替代对照组饲料中35%(D2组)和75%(D3组)的鱼粉。使用3种试验饲料分别投喂的乌鳢幼鱼(初始体重为10.50±0.84g)8周,每种试验饲料分别投喂3个重复,每个重复有乌鳢28尾。试验在室内循环水养殖系统中开展。结果显示:随着豆粕替代鱼粉比例的升高,乌鳢的终末体重、增重率和特定生长率显著降低(P<0.05)。在3个试验组的乌鳢肠道中共分离出产蛋白酶好氧菌21株,其中D1、D2和D3组分别为16株、19株和20株。然后通过测定培养基上水解圈直径与菌株直径的比值(R/r值)来表示菌株的产蛋白酶能力。试验结果显示,随着豆粕替代鱼粉比例的升高,菌株P1004和P1018的R/r值显著降低(P<0.05),但菌株P1009和P1012的R/r值却显著增加(P<0.05)。通过对产蛋白酶能力最大的菌株P1009进行生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析,结果显示菌株P1009为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。本试验结果表明,在乌鳢肠道中定植着丰富的产蛋白酶好氧菌,乌鳢肠道内产蛋白酶好氧菌数量和产蛋白酶能力在一定程度上受到豆粕替代鱼粉的比例的影响,铜绿假单胞菌(菌株P1009)是乌鳢肠道内产蛋白酶能力最强的菌株。试验三:为探究饲料中豆粕替代对肠道菌群,形态和炎性细胞因子基因表达的影响,在乌鳢中进行了为期63天的饲养试验。配制四组等氮、等能的饲料,分别用不同比例的豆粕来代替0%,25%,50%和75%的脱脂鱼粉(饲料分别命名为G1,G2,G3和G4)。结果显示,不同比例的豆粕替代显著影响乌鳢肠道菌群组成(P<0.05)。在门水平上,与变形菌门,拟杆菌门和浮霉菌门相比,厚壁菌门的丰度在G4组中最低(P<0.05)。在属水平上,在饲喂G4组饲料的鱼中发现,乳球菌属、地芽孢杆菌属、假单胞菌属、链球菌属、芽孢杆菌属和不动杆菌属的丰度显著降低(P<0.05),而鲸杆菌属、浮霉状菌属、希瓦氏菌属、热单胞菌属、红长命菌属和肉食杆菌属的丰度显著升高(P<0.05)。随着饲料中豆粕含量的增加,乌鳢后肠的肌层厚度,褶皱高度和微绒毛高度显著降低(P<0.05),同时炎症细胞因子IL-1β,IL-10和IL-17F的相对表达量显著上调(P<0.05)。