血栓显像是新近发展起来的一种新型血栓定位诊断方法,以其无创、精确、高灵敏的特点成为目前最有潜力的深静脉血栓(DVT)诊断方法。该方法的基本原理是将放射性同位素与能够同血栓成分结合的物质或者参与血栓形成的物质偶联,由这些物质携带放射性同位素到达血栓部位,然后通过影像学方法在体外进行观察定位。目前常用来与放射性同位素相连的物质主要是一些针对血栓成分的单克隆抗体,包括抗纤维蛋白抗体、抗血小板抗体、抗D二聚体抗体等。当前,抗人纤维蛋白单克隆抗体介导的血栓显像在临床前动物实验已经取得了较好的效果,但是应用于人体却存在异源蛋白大分子引发的人抗鼠抗体和体内清除缓慢的问题。单链抗体(scFv)是用一段弹性连接肽把抗体的重链可变区与轻链可变区相连,拥有完整抗体的全部抗原结合特异性和与天然抗体分子Fab段相似的抗原亲和力。单链抗体作为最小功能结构单位,具有分子量小、穿透力强、体内半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达以及易于进行基因工程操作等特点。噬菌体文库技术很好地解决了单链抗体构建过程中出现的诸多问题,通过几轮筛选,就能获得比普通单克隆抗体亲和力、特异性更强的单链抗体,且单链抗体表达在噬菌体的表面,而其编码基因作为病毒基因组中的一部分可通过分泌型噬菌体的单链DNA测序推导出来,使得表达蛋白(表现型)和编码基因(基因型)之间完美地联系起来,非常适于大规模生产。在本研究中,我们利用人纤维蛋白免疫小鼠,利用简并引物从小鼠脾脏cDNA中分别扩增VH和VL基因,经重叠延伸PCR将VH和VL基因通过柔性linker拼接成scFv基因,并引入Sfi Ⅰ/Not Ⅰ酶切位点,通过Sfi Ⅰ/Not Ⅰ双酶切克隆入pCANTAB5E噬菌粒载体,转化E. coli TG1构建成噬菌体文库,由于纤维蛋白和纤维蛋白原序列之间只有几个氨基酸残基的区别,为了保证纤维蛋白单链抗体的特异性,采用纤维蛋白原对抗体库进行负筛选,纤维蛋白进行正筛选,经四轮筛选后,用ELISA检测阳性克隆的抗原亲合力和特异性,选择抗原亲合力最强的克隆进行测序分析并在E. coli TOP10中进行可溶性表达。实验结果显示,构建的抗人纤维蛋白噬菌体文库的库容为8.7×106,ELISA测定显示单链抗体具有较高的抗原亲合力和结合特异性；测序结果表明抗人纤维蛋白scFv基因序列全长732bp,编码244个氨基酸,VBASE2数据库分析VH和VL基因序列,显示二者均有明确的3个互补决定区和4个骨架区。抗人纤维蛋白噬菌体文库成功构建为新型血栓显像剂的研究奠定了良好的基础。