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目的:1.探讨不同感染复数(MOI)的人巨细胞病毒(HCMV)在体外对U251胶质瘤干细胞(GSCS)增殖、分化及凋亡的影响。2.用MOI为1的HCMV AD169毒株感染U251GSCS,观察HCMV对U251GSCS在裸鼠大脑内成瘤及血管生成的影响。方法:1.用HCMV AD169毒株感染人胚肺成纤维细胞进行病毒扩增,收集上清并用空斑定量法检测病毒滴度。2.用单克隆培养法从U251胶质瘤细胞中分离出GSCS,用流式细胞仪检测U251GSCS中表达CD133的细胞数。3.用MOI分别为0.2、1、5的HCMV感染U251GSCS。分别在感染后12h、24h、36h、48h时间点,用MTT法检测U251GSCS增殖情况。4.在HCMV感染后48h,用RT-PCR检测U251GSCS中IE-1 m RNA、Bcl-2 m RNA及Bax m RNA的表达。用Western blot检测U251GSCS中IE-1、Bcl-2、Bax和CD133蛋白的表达。5.将MOI为1的HCMV感染U251GSCS,然后接种到10只裸鼠颅内,设为实验组;对照组接种未感染HCMV的U251GSCS。观察裸鼠生长情况及外观变化。6.处死濒死裸鼠,取出脑组织并分理出肿瘤组织做HE染色。用免疫组化法检测肿瘤组织中IE-1、CD34蛋白的表达。7.采用weidner血管计数法计算出实验组和对照组肿瘤微血管密度(MVD)。结果:1.U251胶质瘤细胞在无血清培养基中悬浮生长。流式细胞仪结果显示,U251GSCS中CD133阳性细胞比例达98.00%。2.MTT结果显示,用MOI为1和5的HCMV感染U251GSCS 12h、24h、36h、48h后,与对照组相比,细胞增殖活性显著增加(P<0.05)。而用MOI为0.2的HCMV感染U251GSCS12h、24h、36h、48h后,与对照组比较,细胞增殖活性差异不明显(P>0.05)。3.RT-PCR结果显示,HCMV(MOI=1,5)感染U251GSCS 48h后,细胞IE-1 m RNA、Bcl-2 m RNA的表达上调,Bax m RNA表达下调,与对照组比较,差异显著(P<0.05)。而用MOI为0.2的HCMV感染U251GSCS 48h后,细胞IE-1 m RNA、Bcl-2m RNA及Bax m RNA表达与对照组相比无明显差异(P>0.05)。4.Western blot检测结果显示,与对照组相比,HCMV(MOI=1,5)感染U251GSCS48h后,细胞IE-1、Bcl-2及CD133蛋白表达增多,而Bax蛋白表达下降(P<0.05)。5.接种感染HCMV(MOI=1)的U251GSCS3周后,大部分裸鼠出现活动减少、皮肤皱缩和一些神经症状。6.移植瘤HE染色显示,肿瘤细胞核异形明显。免疫组化结果显示,与对照组相比,HCMV(MOI=1)感染的U251GSCS移植瘤IE-1表达阳性。7.weidner血管计数结果显示,HCMV(MOI=1)感染的U251GSCS移植瘤微血管密度显著高于对照组(P<0.05)。结论:1.一定滴度的HCMV感染U251GSCS可促进其增殖,使其维持干性特征。2.HCMV感染U251GSCS后,细胞表达IE-1并通过下调Bax蛋白的表达和上调Bcl-2蛋白的表达来抑制U251GSCS凋亡。3.HCMV感染可通过促进CD133阳性U251GSCS分化为CD34血管内皮细胞来促进U251GSCS移植瘤的生长,从而增加其恶性程度。