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目的1.探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞(regulatory T cells)静脉输注移植对大鼠脑梗死的免疫调节脑保护作用。2.研究CD4~+CD25~+调节性T细胞输注移植后脑梗死大鼠血浆炎性细胞因子的变化,以及对中枢炎性细胞浸润的影响,并探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞在脑梗死炎症反应发生发展中的作用机制。方法1.免疫磁珠两步法提取健康成年Sprague-Dawley(SD)大鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血2h再灌注。将健康成年雄性SD大鼠随机分为正常组,假手术对照组,脑梗死组,脑梗死组分为静脉输注PBS治疗组,静脉输注脾细胞(spleen cells,SP)治疗组和静脉输注调节性T细胞(Tregs)治疗组。分别于术后24h和72h对各组进行神经行为学评价,并在72h进行TTC染色,计算机图像分析系统测量脑梗死体积。2.选用健康成年雄性SD大鼠,线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血2h再灌注。将动物随机分为正常组,假手术对照组,脑梗死组,脑梗死组分为静脉输注PBS治疗组,静脉输注脾细胞治疗组和静脉输注调节性T细胞治疗组三个亚组。各组动物于治疗72h后断头取脑制备脑组织石蜡切片,免疫组织化学方法染色检测中性粒细胞在脑组织中的分布。生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆细胞粘附分子ICAM-1和炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、 TNF-α、IFN-γ、TGF-β表达水平的变化。结果1.除正常组、假手术对照组外,其余各组动物均于术后出现不同程度的神经功能缺损,尤以脑梗死后静脉输注PBS治疗组和脑梗死后静脉输注脾细胞治疗组最为严重,脑梗死后静脉输注调节性T细胞治疗组显著减轻。Tregs组24h,72h Zea Longa评分都显著低于PBS和脾细胞组(P<0.01)。24h,72h前肢放置实验Tregs组与前两组比较都显著减小(P<0.01)。24h,72h NSS评分Tregs组也显著低于PBS和脾细胞组(P<0.01)。脑梗死后72h梗死体积百分比Tregs组(27.13%)显著低于PBS(42.82%)和脾细胞组(40.85%),具有显著差异(P<0.001)。2.与正常对照组和假手术组相比,脑梗死组粘附分子ICAM-1和促炎性细胞因子明显升高(P<0.05);调节性T细胞治疗组与PBS治疗组和脾细胞治疗组比较,血浆促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的水平显著降低(P<0.001),抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β调节性T细胞治疗组与PBS治疗组和脾细胞治疗组相比显著降低(P<0.001)。调节性T细胞治疗组细胞粘附分子ICAM-1和中枢中性粒细胞浸润与PBS治疗组和脾细胞治疗组相比显著降低,具有显著统计学意义(P<0.01)。结论1. CD4~+CD25~+调节性T细胞静脉输注移植显著减小大鼠脑梗死体积并促进神经功能恢复。2. CD4~+CD25~+调节性T细胞输注移植能够降低脑梗死大鼠血浆细胞粘附分子ICAM-1和炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的水平,并减轻中枢中性粒细胞浸润。