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目的:内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ER stress）是细胞凋亡途径之一,其引起的凋亡与许多疾病的发病机制有关,如神经退行性疾病、新陈代谢疾病、癌症。T细胞的活化诱导细胞凋亡（Activation induced cell death,AICD）是当抗原清除后,机体调控活化T细胞发生主动凋亡,以维持机体免疫稳态的重要机制。本实验初步探讨了内质网应激对T细胞AICD的影响,为进一步深入了解内质网应激在特异性细胞免疫中的调控机制提供初步的理论依据。方法:1.内质网应激对T细胞活化诱导凋亡的调控。（1）小鼠T淋巴瘤细胞株EL-4细胞用Con-A结合IL-2和CD3抗体体外诱导AICD。（2）从C57BL/6小鼠中取出脾脏,研磨,并破红细胞后得到脾脏的单细胞悬液。计数后以2×105细胞加入到96孔板中,用Con-A结合IL-2和CD3抗体体外诱导CD4+T细胞的AICD。（3）经过Con-A和IL-2活化的脾细胞在转移到CD3抗体包被的96孔板培养时,加入内质网应激诱导剂二硫苏糖醇（dithiothreitol,DTT）或内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid,4-PBA）后,继续培养24h。（4）用流式细胞术分析脾细胞中各组T细胞中凋亡细胞（Annexin-V+7-AAD-和Annexin-V+7-AAD+）的百分数。检测内质网应激对于CD4+T细胞AICD过程的调控。2.T细胞定向敲除Sel1L小鼠模型建立（1）应用Cre-lox P重组系统构建条件性基因敲除小鼠,将Lck-Cre杂合子小鼠与Sel1Lfl/fl纯合子小鼠雌雄合笼繁殖,应用聚合酶链式反应以及琼脂糖电泳法进行表达Cre重组酶以及Sel1L基因loxp位点鉴定,筛选出实验所需小鼠。（2）Western Blotting法检测在实验小鼠中脾脏T细胞中Sel1L蛋白的表达水平。3.内质网应激对T细胞定向敲除Sel1L小鼠T细胞活化诱导凋亡的调控。（1）分别从Sel1L基因敲除和野生型小鼠中取出脾脏,研磨收集细胞破红后计数,得到脾脏细胞的单细胞悬液。用Con-A结合IL-2和CD3抗体体外诱导AICD。（2）对两种小鼠体外诱导AICD的过程中同样加入DTT或4-PBA处理后,用流式细胞术分析两种小鼠中各组总T细胞中凋亡细胞（Annexin-V+7-AAD-和Annexin-V+7-AAD+）的百分数。结果:（1）小鼠T淋巴瘤细胞株EL-4细胞和C57BL/6小鼠的脾细胞在体外成功建立T细胞的AICD模型,与对照组相比,诱导组T细胞凋亡水平上调明显。同时也发现了随着CD3抗体浓度的增加,EL-4细胞发生AICD的比例增加。（2）小鼠脾细胞进行AICD诱导时加入DTT或4-PBA后,发现内质网应激的激活,可导致CD4+T细胞的凋亡明显上调,甚至死亡,相反,内质网应激的抑制,CD4+T细胞中发生凋亡的细胞明显低于DTT组和对照组。（3）LckCre×Sel1Lfl/fl即T细胞特异性敲除Sel1L基因的纯合子小鼠被繁殖成功并准确鉴定。LckCre×Sel1Lfl/fl小鼠脾脏T细胞的Sel1L基因的蛋白表达水平与Lck+/+×Sel1Lfl/fl即野生型小鼠相比显著降低。（4）Sel1L基因敲除小鼠（KO）与野生型小鼠（WT）的脾细胞进行AICD诱导时加入DTT或4-PBA后,在Sel1L基因敲除小鼠（KO）发现内质网激活剂或阻断剂的加入,对总T细胞的AICD无明显影响。而WT组在内质网应激激活时,总T细胞的凋亡明显上调。相反,内质网应激的抑制,总T细胞凋亡的细胞明显低于DTT组和对照组。结论:T细胞的活化诱导凋亡过程中,内质网激活剂或阻断剂的加入分别使T细胞的凋亡水平升高或降低。由此可见,内质网应激在T细胞AICD过程起着重要的作用。通过在Sel1L基因敲除和野生型小鼠脾细胞诱导AICD过程中,加入内质网激活剂或阻断剂的结果显示,Sel1L分子是内质网应激调控T细胞AICD的重要组分。