转BMP-2基因干细胞复合nHAC/PLA修复骨缺损的实验研究

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目的研究以纳米羟基磷灰石胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)材料为载体支架复合用BMP-2基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCS)构建的组织工程骨来修复SD大鼠同侧桡骨骨缺损的能力,为临床上骨缺损的修复以及科研应用提供可靠的实验依据。方法将48只重量为180克的SD(雄性)大鼠随机分为4组,每组12只,全部制作成右侧桡骨为5mm的骨缺损模型,每组分别用下列方法将材料植入骨缺损处,A组:nHAC/PLA材料+BMSCS{(骨形态发生蛋白-2)BMP-2和(增强绿色荧光蛋白)eGFP处理};B组:nHAC/PLA材料+BMSCS(无BMP-2和eGFP处理);C组:单纯使用nHAC/PLA材料;D组:空白对照组。术后6、12周用空气栓塞法各组分别处死4、8只大鼠并取右侧整段桡骨,行大体形态学、X线检查、组织学和生物力学最大应力检查。X线结果采用Lane-Sandhu法标准进行评分;组织学检查结果同样也采用Lane-Sandhu法标准进行评分;生物力学最大应力测试结果选用方差分析进行比较,各组数据结果以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,然后采用LSD-t检验行两两比较,P<0.05时有统计学意义。结果①大体解剖观察的结果显示:用BMP-2基因修饰BMSC复合nHAC/PLA构建的组织工程骨所在组(A组)的骨痂产生量要明显高于其它各组。单纯使用nHAC/PLA材料(C组)的骨痂产生量明显少于A组,B组(无BMP-2和eGFP处理)的骨痂产生量介于A组和C组之间,空白对照组基本没有骨痂生成。②X线检查结果进行统计学分析后示:BMP-2基因修饰BMSC复合nHAC/PLA构建的组织工程骨所在组(A组)的骨痂生成量明显优于其它各组,B组次之,C组稍逊于B组,空白对照组最少。③组织学观察结果统计学分析示:BMP-2基因修饰BMSC复合nHAC/PLA构建的组织工程骨所在组(A组)的新生骨以及新生血管的形成等均优于其它各组,B组次之,C组稍逊于B组,空白对照组则最差。④4组生物力学最大应力测试结果显示BMP-2基因修饰BMSC复合nHAC/PLA构建的组织工程骨所在组(A组)的结果具有统计学意义,(P<0.05)。进一步进行两两比较,结果表明BMP-2基因修饰BMSC复合nHAC/PLA构建织的组工程骨植入大鼠桡骨缺损处12周时,最大应力明显优于C组,B介于A组与C组之间,对照组最差。结论①本实验中采用BMP-2基因修饰BMSC再复合nHAC/PLA所构建的组织工程骨具有:生物相容性好、来源广泛、机械强度适宜等特点。②本实验中构建的组织工程骨具有良好的骨诱导、骨传导和骨形成作用。③纳米羟基磷灰石胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)是一种可应用于构建组织工程骨的优质载体材料。④对临床上骨缺损的治疗,特别是血运不佳的骨缺损的治疗具有一定的临床价值。
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