论文部分内容阅读
第一部分目的:探讨热休克处理瘤细胞的溶解物冲击的异基因树突状细胞能否诱生抗肿瘤T细胞免疫。方法:应用热休克处理(43℃加热1hr/37℃保温3hrs)的C57小鼠来源的Lewis肺癌细胞系(LLC)制备的肿瘤溶解物(HLTCL)冲击异基因小鼠(BALB/CKd or 615Kk)骨髓细胞衍生的树突状细胞(Bm-DC)作为瘤苗。应用Western Blot检测HLTCL中可诱导HSP70表达。应用体外吞噬实验分析小鼠ImBM-DC摄取HLTCL能力;藉FCM和细胞因子检测试剂盒分析吞噬HLTCL对小鼠异基因Bm-DC表型和分泌IL-12的影响。应用CFSE标记DC进行体内示踪试验,藉助FCM和共聚焦荧光显微镜观察确认受体DC对异基因DC摄取。藉细胞毒测定(LDH法)和细胞因子检测(ELISA)分析HLTCL冲击的异基因Bm-DC免疫接种的小鼠脾细胞杀伤LLC和产生Th-1相关细胞因子的能力。最后,藉C57小鼠LLC移植瘤的免疫预防和接种1天的早期带瘤鼠的治疗实验评价HLTCL冲击的异基因BM-DC瘤苗的免疫效应。结果:1.热休克可以明显增加LLC-TCL中可诱导Hsp70表达。2.小鼠ImBM-DC能充分摄取HLTCL。3.异基因小鼠ImBM-DC摄取HLTCL后有促进DC成熟的效应(增加DC表面共刺激分子表达和促进其IL-12分泌)。4.体内皮下注射HLTCL冲击的异基因小鼠Bm-DC观察到有促进受鼠DC摄取异基因Bm-DC的效应。5.HLTCL冲击的异基因Bm-DC免疫的C57BL小鼠脾细胞能特异性杀伤活LLC,分泌Th-1相关的细胞因子(高水平IFN-γ和低水平IL-4和IL-10)。6.C57BL小鼠LLC移植瘤免疫保护实验和早期带瘤鼠治疗实验证实,免疫接种HLTCL冲击的异基因Bm-DC能够阻止或延缓LLC肿瘤的生长,其产生的免疫保护效应要比HLTCL冲击的同系DC强。结论:热休克处理瘤细胞的溶解物冲击的异基因树突状细胞瘤苗接种能够诱生抗肿瘤T细胞免疫。第二部分目的:研究低氧标记物CA-9、HIF-1α的表达、肿瘤免疫功能有关的DC,T淋巴细胞浸润、以及肿瘤坏死程度在I期非小细胞肺癌患者中的临床和预后意义。方法:应用免疫组化法检测59例Ⅰ期非小细胞肺癌患者的CA-9、HIF-1α、CD1a、CD208、和CD3的表达。结果:CD1a、CD3在腺癌中的表达明显高于鳞癌;肿瘤高坏死或CA-9高表达者,其肿瘤中的CD1a浸润都低;CD208阴性表达或肿瘤高坏死的患者,其生存率明显低于阳性者或低坏死者;术后化疗组与未化疗组在生存率上未发现有显著性差异,但进一步分层分析显示:在CA-9阳性和CD208阴性的患者中,都发现术后化疗组的生存率短于未行化疗组。结论:非小细胞肺癌早期即有免疫细胞的浸润,肿瘤低氧、不同病理学类型和肿瘤的坏死程度可能影响免疫细胞的浸润;肿瘤的坏死程度和成熟DC的浸润程度影响患者的生存率;检测CA-9和CD208表达可能对Ⅰ期非小细胞肺癌患者术后是否应该化疗有指导意义。