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研究背景：原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,恶性程度及死亡率很高。肝癌的复发和转移是导致治疗失败、患者死亡的主要原因之一。约有66.7%-77.2%肝癌患者的死亡与复发和转移有关。累积的研究发现,HCC的发生和发展是多因素、多步骤参与的复杂病理过程,其中涉及到众多的生长因子、癌基因和抑癌基因的异常激活及表达。因此,深入研究HCC复发转移的分子机制并以此为基础探索防治复发转移的有效措施,对进一步提高HCC的总体治疗水平具有重要意义。高迁徙率族蛋白B1(hign mobility group protein box1, HMGB1)是一种在真核细胞核中表达十分丰富的非组蛋白染色体蛋白。大量研究表明,HMGB1可以主动释放至细胞外,参与肿瘤的发生发展和转移。目前有关HMGB1与肝癌侵袭、转移能力之间的相互关系的研究甚少,本研究拟通过观察HMGB1在三种具有不同转移潜能的人肝癌细胞系中的表达,以及与肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的关系,为肝癌的发病机制及治疗提供新的思路。目的：(1)明确HMGB1与人肝癌细胞株的转移潜能之间是否存在相关性；(2)观察小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)抑制HMGB1的表达对肝癌细胞生物学行为的影响；(3)观察重组人HMGB1(rhHMGB1)和抗HMGB1特异性抗体(HMGB1-Ab)对人肝癌细胞生物学行为的影响；(4)初步探讨HMGB1影响人肝癌细胞生物学行为的可能机制。方法：(1)常规提取细胞总mRNA及总蛋白,并于0h、12h、24h、48h分别收集三种细胞培养上清,应用RT-PCR、Western blotting及ELISA的方法从mRNA水平及蛋白质水平检测HMGB1的表达；(2)设计并合成靶向HMGB1的三对siRNA片段(siRNA1、siRNA2、 siRNA3),应用脂质体法瞬时转染入人肝癌细胞内,同时设立阴性对照组及空白对照组,48h后收集细胞,采取RT-PCR、Westerning blotting法检测HMGB1的表达被抑制的情况,筛选出最佳沉默序列,并分别应用MTT实验、迁移实验及侵袭实验观察抑制HMGB1表达后,肝癌细胞增殖、迁徙、侵袭能力的变化；(3)体外分别应用rhHMGB1或HMGB1-Ab处理人肝癌细胞,应用MTT法、迁移实验及侵袭实验观察肝癌细胞增殖、迁徙、侵袭能力的变化；(4)分别从mRNA水平和蛋白水平观察HMGB1对细胞内NF-κB p50及p65表达的影响；(5)实验数据用均数±标准差(x±s)表示,应用SPSS16.0软件进行分析处理。两组比较采用student-t检验,多组比较采用方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果：(1)HMGB1mRNA及蛋白水平在三种不同转移潜能肝癌细胞系中的表达有显著差异,与转移潜能相关,在无转移潜能肝癌细胞Hep3B、低转移潜能肝癌细胞MHCC97L、高转移潜能肝癌细胞HCCLM3中,HMGB1mRNA的相对表达量分别为0.912±0.004、1.289±0.008、1.400±0.007(P<0.05),蛋白质的相对表达分别为0.841±0.033、0.963±0.022、1.141±0.027(P<0.05)：HMGB1在三种细胞培养上清中的含量均较高,但未发现其与时间以及细胞转移潜能之间存在相关性。(2)转染3对特异性siRNA后,应用RT-PCR检测siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组、NC组(转染无关序列的siRNA)、 BLANK组(空白对照组)的HMGB1mRNA相对表达水平,分别为0.195±0.003、0.358±0.037、0.744±0.019、0.996±0.012、0.823±0.037：siRNA系列组与对照组相比,HMGB1mRNA表达量均下降,t值分别为4.302、5.885、2.776,P值均<0.01,其中siRNA1抑制率最高,经过优化转染条件后,抑制率稳定在60%左右。(3)rhHMGB1可以促进人肝癌细胞HCCLM3的增殖、转移和侵袭,反之下调HMGB1的表达和应用特异性抗体阻断HMGB1的作用可以减弱上述生物学作用。转染小干扰RNA或加入HMGB1-Ab后，HCCLM3细胞的增殖、迁移以及侵袭与对照组相比,均明显下降(P<0.05)；而加入rhHMGB1(50ng/L)后,细胞的增殖、迁徙及侵袭均增强(P<0.05)。(4) HMGB1可以调节HCCLM3细胞中NF-κB p50及p65的表达。与对照组相比,小干扰RNA组NF-KB p50及p65mRNA及蛋白表达下调,而rhHMGB1组NF-KB p50及p65mRNA和蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：(1)证实HMGB1在三种不同转移潜能肝癌细胞系中的表达存在差异,提示HMGB1与肝癌细胞的转移、侵袭能力之间存在一定的联系；(2)rhHMGB1可以促进人肝癌细胞系HCCLM3的增殖、转移及侵袭；而应用小干扰RNA技术抑制内源性HMGB1的表达或加入HMGB1特异性抗体可以减弱人肝癌细胞系HCCLM3的增殖、转移及侵袭,HMGB1可能成为肝癌治疗的一个潜在靶点。(3)HMGB1可以调控HCCLM3细胞内NF-κB的表达,提示其在肝癌细胞的增殖、转移、侵袭方面发挥的生物学作用,可能与NF-κB信号通路的激活具有十分密切的联系。