背景：大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一，常用的手术、化疗、放疗等传统的治疗方式均未能使其疗效得到明显的提高。随着分子生物学及基因工程技术的发展，基因治疗已成为研究热点，其中自杀基因治疗是一种较为有效和具有临床应用潜力的治疗策略。它是把某些能将非毒性药物代谢成细胞毒性药物的非哺乳动物体内的一种酶基因—自杀基因，经分子生物学途径导入肿瘤细胞，使之在肿瘤细胞内特异地表达，该基因产物能将无毒的药物前体代谢为毒性产物，从而影响肿瘤细胞的DNA合成，引起细胞的死亡。目前HSVtk/GCV是用于治疗大肠癌最常用的系统之一。 目的：观察GCV能否诱导HSVtk+/LoVo细胞凋亡及对HSVtk+/LoVo肿瘤细胞周期的影响。观察并比较GCV联合5-FU体外杀伤人大肠癌HSVtk+/LoVo细胞疗效，探讨HSVtk/GCV系统联合常规化疗药物5-FU治疗动物大肠癌皮下种植瘤的可行性、有效性和安全性，为自杀基因能早日应用于临床治疗大肠癌探索可行的途径。 方法和结果一、HSVtk+/LoVo细胞的复苏和培养 在前期体外逆转录病毒介导HSVtk基因转导人大肠癌LoVo细胞，获得经G418筛选的HSVtk阳性细胞克隆HSVtk+/LoVo的基础上，复苏冻存的HSVtk+/LoVo细胞生长良好。二、GCV体外诱导HSVtk+/LoVo细胞凋亡 以GCV作用于生长良好的HSVtk+/LoVo细胞，经倒置显微镜、荧光显微镜和电镜观察细胞形态变化，并用流式细胞仪检测细胞周期。结果显示细胞明显凋亡，且凋亡百分率随GCV作用时间的增加而升高。经GCV作用后的肿瘤细胞，细胞周期变化明显，GJGI期细胞从42．3％下降到31．3％，S期细胞从38．7％上升到62刀％。三、GCV联合5FU对HSVtk＋／L。VO细胞体外杀伤作用 分别用含5－FU、GCV和 5．FU＋GCV的培养液培养HSVtk＋／L。Vo细胞，以正常生长组为对照，培养 24小时，MTT法测定各组光密度（OD）值并计算生长抑制率。结果5FU组、GCV组和联合治疗组OD值均较对照组明显减小，说明5－FU、GCV对HSVtk＋／L。Vo细胞有较强的杀伤作用，且联合治疗效果最佳。四、GCV联合5FU对裸鼠HSVtld－xr－－VO细胞皮下种植瘤的杀伤作用 将HSVtk＋几oVo细胞悬液0．lml分别于每只裸鼠右侧背部皮下接种。细胞接种第 10天，将小鼠随机分成 4组。第一组裸鼠腹腔内注射 GCV生理盐水溶液；第二组裸鼠腹腔内注射5IU生理盐水溶液；第三组注射＊＊V＋5－＊U：第四组注射生理盐水作为对照组，每日两次，连续5天。细胞接种10天后，每隔5天测量肿瘤大小。第30天断颈处死裸鼠，测量肿瘤体积，并计算肿瘤生长抑制率。取肿瘤组织及多种组织包括心、肝、肾、肺等进行HE染色，观察有无组织学改变。结果治疗组肿瘤较对照组明显减小，且联合治疗组疗效最好，心、肝、肾、肺等组织未发现病理改变。结果提示HSVtk／GCV联合5FU治疗大肠癌是可行有效的。 －3－ 结 论 GCV体外可诱导HSVtk＋／L。Vo细胞凋亡，且凋亡百分率随GCV作 用时间的增加而升高；经GCV作用后的HSVtk＋／L。Vo细胞，阻滞于S 期；GCV联合5平U对人大肠癌HSVtk＋／L。VO细胞有较好的杀伤作用； GCV联合5IU可以更有效地抑制裸鼠HSVtk＋／L。Vo细胞皮下种植瘤生 长，且无明显的毒副作用。