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目的 支气管哮喘是由多种炎症细胞和炎症因子共同参与的气道慢性炎症。该炎症使易感者对多种激发因子具有气道高反应性。随着对哮喘气道炎症研究的深入，气道神经源性炎症与哮喘的关系倍受重视。现认为气道神经源性炎症的主要递质是感觉神经肽，而P物质是主要的神经递质。现研究证实P物质主要通过增加粘液分泌，增加血管渗出，增加小支气管平滑肌收缩性引起气道高反应性，参与哮喘病理生理过程。而上述生物活性是通过其特异性NK1受体来起作用的。有学者研究证明哮喘豚鼠血浆、BALF及肺组织中SP的表达较正常豚鼠显著增加。但有关SP受体NK1mRNA在哮喘气道的表达及其影响因素尚待研究。为此，本研究通过原位杂交方法研究哮喘豚鼠气管及肺内支气管中NK1mRNA的分布及相对含量，并与正常豚鼠相比较。为探讨NKlmRNA的影响因素，我们还观察吸入气道保护剂（盐酸氨溴索，沐舒坦）对哮喘豚鼠气道内NK1 mRNA的影响。 材料与方法 1 动物实验部分 （1）豚鼠哮喘模型的制作： 参照目前国内外通用Hutson方法制作：将单只豚鼠置于半封闭的容器中，于第1、4、7天分别超声雾化吸人1％卵蛋白3分钟使其致敏；第21天超声雾化吸入2％卵蛋白5分钟诱喘。如该豚鼠出现剧烈咳嗽、打喷嚏、呼吸困难、喘息、呼气费力或点头样呼吸，听诊闻及喘鸣音，这表明哮喘模型制作成功。对照组吸入生理盐水无上述症状。 （2）豚鼠来源及分组 选择同种属、同月龄（1.5月），同体重（250±20g），饲养条件一致的豚鼠共40只，雌雄各半，随机分成以下各组。按不同的影响因素进行分别研究。其中正常组10只，哮喘组15只，吸入沐舒坦治疗组15只。哮喘组及吸入沐舒坦治疗组先后共有5只豚鼠因为互相咬伤未参与统计。 （3）因素处理及取材时机 A:哮喘组:按哮喘模型制作方法（同上）。致敏后第21天诱喘，诱喘成功后24小时取材。 B:沐舒坦治疗组:卵蛋白吸人致敏及诱喘同哮喘组。自致敏第7天，每只豚鼠每日用压缩雾化机面罩吸人沐舒坦雾化溶液（原液），每次5分钟，日二次。第21天诱喘，诱喘后24小时取材。 C:正常对照组:用生理盐水代替卵蛋白吸人，吸人方法同哮喘组并同期取材。 （4）标本取材:豚鼠取材前以1%戊巴比妥麻醉（40m扩kg）以无菌专用器械（0.1%的DEPC浸泡24小时，高压灭菌）操作，取右上肺中段，用含DEPC的4%多聚甲醛固定（病理切片、原位杂交），制成石蜡切片; 2实验方法 （1）原位杂交检测:试剂盒采用针对NK;mRNA的寡核昔酸探针，经地高辛标记，在肺组织及气管石蜡切片上原位显示NKI mRNA表达。 （2）于光镜下观察:NK，mRNA在气管及肺组织中的分布，三组间进行着色比较。 （3）对原位杂交切片进行图像分析:应用美国Meta MO甲扮Dplo/Bx41，Met。Imageing se五es 4.6软件对三组光密度（NK:mRNA相对含量）进行分析。 3结果判定及数据处理 （1）NKI原位杂交结果:在显微镜下观察其表达的部位及强度，有NKImRNA表达的细胞浆呈棕黄色。 （2）用计算机图像分析系统对原位杂交切片进行分析，所得数据用又土s表示，组间进行统计学分析。结果 哮喘豚鼠气道内NK:mRNA的表达: （1）于镜下观察哮喘组可见明显的NK，mRNA表达，表达程度明显高于正常组及沐舒坦组台主要分布于气管及支气管上皮细胞上层细胞表面，粘膜下层，血管周围上皮细胞，炎症细胞的表面和平滑肌细胞，腺体细胞表面。正常组仅于气管上皮细胞及粘膜下层呈微弱着色。 （2）沐舒坦治疗后哮喘豚鼠气道内NK，mRNA表达的变化: 沐舒坦治疗组与哮喘组比较明显减弱，主要分布于气管及支气管上皮细胞表面，粘膜下层，血管周围上皮细胞及平滑肌细胞表面。着色弱于哮喘组但仍强于正常组。 （3）各组间肺内支气管NKI mRNA相对含量比较、: 统计分析显示:哮喘豚鼠肺内支气管中NKI mRNA相对含量较正常豚鼠明显增加，差异显著，P<0.01。吸人沐舒坦组哮喘豚鼠肺内支气管中NK;mRNA相对含量与哮喘豚鼠相比明显减少，差异显著，P<0 .01，但仍高于正常组豚鼠，P<0.05。讨论 支气管哮喘是一种慢性气道炎症，其中许多细胞和细胞成分起重要作用，并伴有气道反应性的增加。近年来，神经免疫机制被提出与哮喘的发病机制有关。迄今在整个呼吸道中较确定的神经肤类物质近20种，感觉神经肤是其中一种。sP是一种重要的感觉神经肤，它在人体肺组织中含量最多。SP在人体内的作用包括:强烈收缩气道粘膜，增加微血管渗出及促进粘液分泌，并通过诱导其他炎症细胞分泌炎症介质，诱导慢性咳嗽和咳嗽变应性哮喘。SP通过其特异性受体NK;来发挥其生物活性。NK:的作用包括:收缩气道，扩张血管和增加血浆渗出，增加血管渗透性。各种研究证明SP在哮喘患者的气道中表达增加，因此，NK，受体拮抗剂的开发对于哮喘的治疗有可能是一种新的途径。本试验主要观察哮喘豚鼠肺组织中sP受体（NKI）m驯A表达的变化。本试验通过于光镜下观察原位杂交切片发现NK:mRNA主要定位于血管及气管平滑肌周围，气道上皮及粘膜?