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背景肺癌是世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤,由于其在确诊时往往已错过最佳治疗时期,因此对人类的生命健康构成了重大威胁。非小细胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)是所有肺癌中最主要的一种,约占所有肺癌类型的80%～85%,其5年生存率不超过15%。因此筛选可靠的临床生物学指标有效预测NSCLC患者的预后情况对制定个体化治疗方案具有重要意义。微小RNA (microRNA, miRNA)作为肿瘤分子生物学研究领域的热点,在肿瘤的发生发展中发挥重要作用,研究发现血清／血浆中存在上百种miRNA,且存在显著的疾病特异性并与疾病的状态有一定联系,因此在肿瘤的诊断、治疗及预后监测方面有一定的应用价值。本实验室前期以人肺腺癌细胞株SPC-Al作为免疫原,成功制备了特异性抗人非小细胞肺癌的单克隆抗体NJ001,以该抗体作用于SPC-Al不同时间段可诱导其凋亡,并通过基因表达微阵列分析发现,在众多miRNA中,miR-638表现出最显著的时间依赖性表达上调,其表达上调与NJ001诱导的SPC-Al细胞凋亡相关。故本研究以miR-638为切入点,探讨其在NSCLC临床化疗过程中作为预后指示的价值。目的本研究以肺癌常用化疗药物顺铂(cisplatin, DDP)作用于人肺腺癌细胞株SPC-Al诱导其凋亡以及所引起的miR-638表达改变为基础,探讨顺铂诱导肺癌细胞凋亡与miR-638表达的相关性,在此基础上进一步检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者化疗过程中血清miR-638的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的相关性及不同miR-638表达模式的患者预后的差异。探讨miR-638在NSCLCI临床化疗过程中作为预后指示的价值。方法体外培养SPC-Al细胞并分别用不同浓度的顺铂作用不同时间,采用实时荧光定量PCR检测顺铂作用后SPC-Al培养上清和细胞内miR-638的表达水平；流式细胞术检测SPC-Al细胞凋亡率。收集2009年1月至2013年3月在南京医科大学第一附属医院住院治疗的89例NSCLC患者一线药物化疗前后的血清样本,实时荧光定量PCR检测血清miR-638表达水平,比较化疗后其表达水平改变与NSCLC临床参数(年龄、性别、吸烟史、TNM分期和淋巴结转移)之间的关系,并分析其与预后的关系。结果SPC-Al细胞经不同浓度顺铂处理后,流式细胞术结果显示顺铂在体外诱导SPC-Al细胞凋亡,并且在浓度为2.5μg/ml和5μg/ml时,处理组凋亡率较对照组显著增高,呈现浓度依赖性和时间依赖性增高。实时荧光定量PCR结果表明,当顺铂浓度为2.5μg/ml和5μg/ml时,SPC-Al培养上清和细胞内miR-638的表达水平呈现时间依赖性升高；当顺铂浓度为2.5μg/ml时,SPC-Al培养上清和细胞内miR-638在作用后72h出现明显表达上调,此时上清中miR-638水平为对照组的3.90倍(P<0.05)；细胞内miR-638水平为对照组的4.49倍(P<0.05)；当顺铂浓度为5μg/ml时,SPC-Al培养上清和细胞内miR-638水平在作用后24h即出现明显表达上调,且表达水平随时间延长而增高,上清中miR-638在24h、48h和72h的表达水平分别为对照组的1.65倍(P<0.05)、1.81倍(P<0.05)2.74倍(P<0.05),差异有统计学意义；细胞内miR-638在24h、48h和72h的表达水平分别为对照组的1.75倍(P<0.05)、10.21倍(P<0.05)、6.89倍(P<0.05)。相关性分析显示培养上清miR-638表达水平(顺铂浓度为2.5μg/ml时,r=0.808、P<0.001；顺铂浓度为5μg/ml时,r=0.711、P=0.001)和细胞内miR-638表达水平(顺铂浓度为2.5μg/ml时,r=0.823,P<0.001；顺铂浓度为5μg/ml时,r=0.744、P<0.001)均与SPC-A1凋亡率呈显著正相关。89例NSCLC患者化疗前后的血清miR-638表达水平显示,在含一线化疗药物(顺铂)标准化疗一周期后,有78例患者血清miR-638表达水平发生了明显改变,其中43例患者化疗后血清miR-638表达上调,35例患者化疗后血清miR-638表达下调。化疗后血清miR-638表达模式与临床病理参数如年龄、性别、有否吸烟史、TNM分期均无明显相关,而与肿瘤淋巴结转移显著相关,化疗后血清miR-638表达上调者其淋巴结转移率(32/43)明显低于血清miR-638表达下调者的淋巴结转移率(33/35)(74.4%vs94.3%,χ2=5.48.3,P=0.019)。根据化疗后血清miR-638不同表达模式进行Kaplan-Meier生存分析,结果显示,血清miR-638表达上调者的总体生存率明显高于表达下调者,差异有显著性(P=0.008)。Cox比例风险模型分析提示,化疗后血清miR-638表达改变模式是影响NSCLC患者预后的独立危险因素。结论顺铂体外诱导SPC-A1细胞凋亡过程中伴随着miR-638表达水平的增高,且二者存在显著正相关。血清miR-638表达改变模式与NSCLC的淋巴结转移密切相关,并且是影响NSCLC患者预后的独立危险因素,有望作为指示NSCLC预后的生物学标志。