目的:观察不同浓度vaspin对大鼠BMSCs成骨分化的影响,并研究Wnt通路是否参与vaspin对BMSC成骨分化的影响。方法:1.全骨髓贴壁法分离培养4周龄雄性SD大鼠BMSCs,传代培养至P3代作为体外试验模型,观察细胞形态学及流式细胞仪检测表面标记物。2.实验分组:对照组加入成骨诱导液、实验组:分别加入含10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml vaspin成骨诱导液及含100ng/ml vaspin成骨诱导液+DKK1(Wnt/β-catenin信号通路特异性阻断剂),于成骨诱导第7天酶标仪检测碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR检测ALP、核心蛋白结合因子2(Runx2)、及β-catenin m RNA表达水平。3.100ng/mlvaspin联合成骨诱导液干预BMSCs,于3周后茜素红染色。结果:1.P3代BMSCs,呈长梭形,细胞分布成簇或旋涡状;细胞表面抗原CD44、CD90(+),CD34(-),符合BMSCs表面标志物特点。2.Vaspin对BMSCs成骨分化的影响:(1)ALP活性:和对照组比较,低浓度组无明显增加(P>0.05),在中高浓度组均有明显增加(P<0.05);(2)ALP、Runx2m RNA表达:与对照组相比,ALPm RAN表达水平均显著升高(P<0.05);Runx2m RNA表达水平亦呈剂量依赖性增加,在低浓度组与对照组相比无显著差异(P>0.05),在中高浓度组均有明显升高(P<0.05)。(3)矿化结节:100ng/mlvaspin干预21天后,100ng/ml组矿化结节较对照组增多,呈红棕色。3.Wnt/β-catenin信号通路的影响:(1)β-catenin m RNA表达水平呈剂量依赖性升高,与对照组相比,在低中浓度组无显著差异(P>0.05),高浓度组存在显著差异(P<0.05)。(2)加入Wnt通路特异性阻断剂DKK1后,与100ng/ml组相比,ALP活性、ALP、Runx2m RNA及β-catenin m RNA表达水平均显著下降(P<0.05)。结论:大鼠骨髓间充质干细胞可以为体外研究成骨分化提供模型。Vaspin可呈剂量依赖性促进BMSCs成骨分化,且可能通过Wnt/β-catenin信号通路上调Runx2转录因子促进成骨分化。