瑟氏泰勒虫(Theileriasergenti)是寄生于牛体内的一种血液原虫,是泰勒虫科、泰勒虫属,主要寄生于牛的淋巴细胞、红细胞、巨噬细胞中,通过蜱进行传播。现阶段,随着养牛业的不断发展,牛的瑟氏泰勒虫病近几年发生频率呈现上升趋势,对养牛业的危害极大。但到目前为止还没有特效药物用于瑟氏泰勒虫病的治疗和预防,而且尚无该病的疫苗。瑟氏泰勒虫p33基因,是该虫体的主要表面蛋白基因,具有较好的免疫原性和反应原性,认为是较理想的候选抗原。真核表达系统,除了具备原核表达系统的优点外,还具有表达外源蛋白量高、遗传性状稳定、产物提纯简单等诸多优点,受到越来越多的人青睐。本试验根据Genbank中T.sergentip33基因中国株序列,设计一对特异性引物,用常规PCR扩增出大小为786 bp的p33目的基因片段,将其克隆到pMD-19-T载体上,构建pMD-19-T-p33重组克隆质粒,经PCR、双酶切鉴定测序分析,证实目的片段正确地克隆到pMD-19-T载体上。然后将p33基因亚克隆到酵母表达载体pPICZaA上,重组质粒经PCR、EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定,证实成功构建含有目的基因片段的真核表达载体pPICZα A-p33。然后将其转化到GS115酵母感受态细胞中,最终通过800μg/ml浓度的博来霉素筛选得到高拷贝重组子,经PCR筛选阳性菌株后,通过最终浓度为1%的甲醇诱导并在毕赤酵母中大量表达外源蛋白,然后对诱导产物进行SDS-PAGE,得到大小为29.67Ku的蛋白,与预期结果相符合。而后对诱导蛋白进行Western blot反应原性鉴定,蛋白可以被牛瑟氏泰勒虫的阳性血清特异性识别,表明得到的蛋白具有较好的反应原性。本试验结果为以后瑟氏泰勒虫病诊断试剂盒、瑟氏泰勒虫p33基因的单克隆抗体和瑟氏泰勒虫病疫苗研究等研究打下坚实的基础。