酪蛋白是乳中含量最丰富的蛋白质,含有人体生长发育所必须的氨基酸。近年来的研究结果表明,酪蛋白除具有营养功能之外,还具有非常重要的生理功能,是生物活性肽的重要来源。其中酪啡肽具有抑制肠道运动,免疫促进,促进胰岛素的分泌等生理作用而备受关注。大量科学研究表明,通过选择适当的蛋白酶,水解的蛋白质可以得到大量的具有各种生物功能的生物活性肽。 研究了胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶对干酪素的水解,用甲醛固定法对蛋白质的水解度进行测定,并用水解度(DH)表征其反应历程。分析了底物浓度([S])、酶浓度([E])及时间(t)等参数对DH、水解速度的影响。采用四因素三水平正交实验设计,以DH为指标,对蛋白酶水解酪蛋白的条件进行优化,以获得几种蛋白酶的最佳反应条件。 胰蛋白酶水解酪蛋白,最佳水解条件为酶浓度0.15%、温度55℃、PH 7.5、底物浓度6%,水解30min其DH值为16.67%;木瓜蛋白酶水解酪蛋白,最佳水解条件为酶浓度0.8%、底物浓度2%、PH6.0、温度70℃,水解1小时其DH值为12.14%;中性蛋白酶水解酪蛋白,最佳水解条件为酶浓度0.6%、底物浓度2%、温度55℃、pH=8.0。水解其DH值为10.05%。 利用Sephadex G-15交联葡聚糖凝胶柱(1.7cm×57.5cm)粗分离胰蛋白酶—胃蛋白酶、中性蛋白酶—胃蛋白酶、木瓜蛋白酶—胃蛋白酶组合酶的酪蛋白水解液,根据Sephadex G-15分离蛋白质的标准曲线方程lgM=4.82216-2.81531Kav得到水解度与分子量的关系。 用RP—HPLC检测β—酪啡肽—7,采用ODS柱(250mm×4.6mm,4.7μm),