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在传染性疾病中,结核病(TB)依然是世界上的头号杀手,每年要夺走超过三百万人的生命,研究和开发高效创新药物是治疗这一疾病的主要手段。KJY-01是南京长澳医药科技有限公司以抗结核新药SQ109为先导药物,在设计合成了大量新化合物进行广泛筛选的基础上而自主研发的一种新型抗结核杆菌候选药物。KJY-01具有自主知识产权,经前期研究发现,该化合物有效性和安全性良好,有望成为下一代治疗耐多药性结核杆菌疾病的候选药物。
本论文以抗结核新药KJY-01为研究对象,围绕其体外抗结核菌活性、体外细胞毒性、质量控制及大鼠体内初步药代动力学展开研究,主要研究内容如下:
1、在体外抗结核活性研究方面,本试验选择KJY-01、SQ109及常用的一线抗结核药物利福平、异烟肼、链霉素及乙胺丁醇,针对结核分枝杆菌标准菌H37Rv(ATCC27294)、5株WHO质控株、10株MDR临床菌株和5株XDR临床菌株,通过使用96孔平板微量稀释药敏试验方法(MABA法),测量并比较这6种药的MIC值,检测KJY-01的体外抗结核活性。结果表明KJY-01具有良好的体外抗耐多药结核菌效应,是具有潜在研究价值的抗结核新药。
2、在体外细胞毒性研究方面,本实验采用苯基溴化四氮唑蓝法(MTT)分别考察了4种一线抗结核药物、KJY-01和SQ109对小鼠脾细胞及肝细胞的毒性,测定了其体外细胞存活率。结果表明,KJY-01对于小鼠正常脾细胞和肝细胞在所测药物浓度范围内没有毒性作用,具有新型抗结核药物开发的潜力。
3、在质量研究方面,本文结合KJY-01的化学结构特点和生产工艺设计实验方案,对性状、理化常数、鉴别、检查及含量测定等项目进行研究。建立了测定KJY-01有关物质的HPLC方法,建立了测定KJY-01含量的HPLC和电位滴定方法,建立了毛细管气相色谱法对有机溶剂残留量进行了测定,并按照ICH要求进行了完整的方法学研究和方法验证。在稳定性研究方面,通过影响因素试验、加速试验及长期试验,对影响KJY-01稳定性的温度、湿度、光照等因素进行了考察,为本品生产、包装、贮存、运输条件的设计提供了科学依据,同时根据试验结果初步确定药品的有效期为两年。
4、在药代动力学研究方面,本文对KJY-01进行了大鼠体内的早期药代动力学研究。由于KJY-01在体内迅速代谢为母药SQ109,因此试验中主要通过测定SQ109的浓度,以反映KJY-01在动物体内的药物浓度变化情况。本论文建立了前药KJY-01的有效代谢物SQ109在大鼠血浆中的高效液相色谱质谱联用(HPLC／MS)测定方法,以SQ109为测定药物,酮康唑为内标,进行了全面系统的方法学验证,验证结果表明该方法适用于KJY-01在大鼠体内药代动力学研究。大鼠静注给药KJY-01后能大部分迅速转化为SQ109,与静注SQ109相比,二者的动力学参数无明显差异,表明KJY-01没有改变SQ109的基本药代动力学特征,KJY-01在大鼠体内的药动学特征符合线性二房室开放模型。大鼠灌胃给药1.5mg·kg-1 KJY-01后绝对生物利用度F平均为28.71％,灌胃给药13.0mg·kg-1 KJY-01后绝对生物利用度F平均为46.14％,较其母药SQ109均有很大提高。灌胃给药后拟合的血药浓度.时间曲线也符合线性二房室开放模型,统计矩数据与房室模型数据无明显差异。