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目的:类风湿关节炎（rheumatic arthritis，RA）是一种系统性自身免疫性疾病，疾病最终阶段伴有关节进行性损伤和残疾，严重影响患者生活质量。对类风湿关节炎早期有效的治疗，可以缓解患者症状，延缓疾病进展，降低RA的致残率，大大提高患者的生活质量。生物制剂从20世纪90年代中期已经开始应用于临床，对RA的治疗药物包括TNF因子拮抗剂，IL-1受体拮抗剂，IL-6受体拮抗剂类等。虽然生物制剂的出现为RA的治疗带来了革新，但RA具有异质性，仍有很大部分患者对现有的RA治疗方法不敏感。越来越多的基础和临床研究，着眼于在滑膜炎中起重要作用的细胞因子，以期为RA治疗寻找新的靶点。细胞因子IL-22是具有179个氨基酸长度的蛋白质，为IL-10家族中的成员之一。对肿瘤的研究发现IL-22具有促进肿瘤增殖，抑制肿瘤细胞凋亡的作用，并且与肿瘤的远处转移相关。RA的滑膜组织具有肿瘤组织样特性，异常增殖，抑制凋亡，侵蚀性等。对RA的临床研究发现，IL-22与RA发生、发展相关，具体机制尚不明确。细胞凋亡即程序性死亡，是细胞在活体组织中被完全清除的过程。细胞凋亡的启动有外源性通路和内源性通路，当细胞表面的凋亡相关受体，如Fas与相应的配体结合，启动凋亡为细胞外源性通路，当Bcl-2家族前凋亡蛋白表达引起线粒体外膜通透性增加启动凋亡为细胞内源性通路。两个通路共同激活半胱天冬酶蛋白酶家族(Caspase家族)，最终引起细胞凋亡。目前IL-22对滑膜细胞凋亡的影响报道尚少。本实验主要研究IL-22对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(rheumatic arthritis fibroblast-likesynoviocytes，RA-FLS)凋亡的影响及其机制，为RA治疗提供新的靶点。 研究方法:滑膜组织均来自大连医科大学附属第一医院2015.1～2015.7行人工关节置换术的RA患者。对滑膜组织进行原代培养，获得RA-FLS。WB(westernblotting)方法检测IL-22R1、pSTAT3-Y705，pSTAT3-S727，STAT3、Bcl-XL、 Bcl-2蛋白表达。MTT(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide))法检测细胞活性，AV/PI(annexin V/propidium iodide)染色流式细胞术检测细胞凋亡百分数。时实荧光PCR(real-time PCR)法检测Bcl-XL和Bcl-2 mRNA的表达。 实验结果:1、RA-FLS表达IL-22R1。用WB方法检测RA-FLS中IL-22R1的表达，结果显示，RA-FLS细胞与阳性对照细胞HepG2比较，IL-22R1的表达无差异。结果表明RA-FLS高表达IL-22R1。2、IL-22促进SNP诱导的RA-FLS增殖、抑制凋亡。用SNP诱导RA-FLS细胞凋亡，用MTT法检测加入不同浓度的IL-22后RA-FLS细胞活性变化，用AV/PI检测细胞凋亡百分数变化。结果显示不同剂量的IL-22作用，1ng/ml IL-22对SNP诱导的RA-FLS细胞活性影响不明显，10 ng/ml、100ng/ml IL-22能增加细胞活性，抑制SNP诱导的RA-FLS凋亡的发生。IL-22(10ng/ml)+SNP组较SNP组，细胞凋亡百分数明显减少（51.11±1.23 vs67.87±4.75，p＜0.05），IL-22(100ng/ml)+SNP组较SNP组，细胞凋亡百分数减少更明显（34.25±1.98 vs67.87±4.75，p＜0.01）。3、IL-22通过STAT3通路抑制RA-FLS细胞凋亡。首先，WB法检测pSTAT3-Y705和pSTAT3-S727表达，结果显示IL-22作用30分钟后，RA-FLS中pSTAT3-Y705和pSTAT3-S727表达就明显增加，有统计学意义，表明IL-22可以激活STAT3通路。其次，加入STAT3通路特异性抑制剂HO3867或STA21，AV/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡，结果显示SNP+IL-22+HO3867组较SNP+IL-22组（48.91±2.99 vs31.41±4.55，p＜0.05）、SNP+IL-22+STA21组较SNP+IL-22组（61.97±7.09 vs31.41±4.55，p＜0.05），细胞凋亡百分数均明显增加，HO3867、STA21抑制了IL-22对RA-FLS的保护作用。4、IL-22激活STAT3通路下游靶基因Bcl-2、Bcl-XL表达。用WB法和rt-PCR检测STAT3下游靶基因Bcl-XL、 Bcl-2转录表达。WB结果显示SNP+IL-22组较SNP组Bcl-2、Bcl-XL蛋白表达明显增加，加入STAT3抑制剂的SNP+IL-22+HO3867组、SNP+IL-22+STA21组较SNP+IL-22组Bcl-2、Bcl-XL蛋白表达均明显减低，有统计学意义(p＜0.05); real-time PCR测得Bcl-2、Bcl-XLmRNA水平变化与WB测得的Bcl-2、Bcl-XL蛋白水平变化结果相一致。IL-22促进SNP诱导的RA-FLS细胞Bcl-2、Bcl-XL蛋白和mRNA水平增加，加入STAT3通路抑制剂HO3867或STA21，Bcl-2、Bcl-XL蛋白和mRNA水平均明显降低。 结论:1、RA-FLS表达IL-22R1。2、IL-22抑制SNP诱导的RA-FLS凋亡。3、IL-22激活STAT3通路，使pSTAT3-Y705和pSTAT3-S727表达增加。4、IL-22促进STAT3通路下游抗凋亡基因Bcl-2表达，抑制RA-FLS凋亡。