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虫媒病是指由节肢动物通过直接或间接接触传播给人和动物的一类传染性疾病,主要包括蚊传、蜱传和蝇传等疾病,其中流行性乙型脑炎和细菌是当前在我国流行最广泛、危害最严重的、带来主要公共卫生问题的病原体。本研究以蚊传播的流行性乙型脑炎病毒和蝇携带的7种细菌为研究对象,建立环介导等温扩增技术（RT-LAMP）和PCR-反向线状印迹杂交技术（RLB）检测方法,旨在为对甘肃省虫媒病的调查和风险评价提供技术支撑。1.针对GenBank上公布的流行性乙型脑炎病毒E基因序列,设计了四对特异性引物,并对反应体系进行了优化,建立了可用于乙型脑炎病毒检测的RT-LAMP方法,敏感性可达到10-2PFU,高于RT-PCR方法的100PFU。首次将所制备的花状、片状、颗粒状ZnO纳米材料应用于已建立的RT-LAMP方法中,结果显示,添加花状ZnO纳米材料效果最佳,可使RT-LAMP检测方法的反应时间、反应温度由原来的50 min和65℃降低到30 min和60℃,可大大提高该方法的现场诊断价值。2.利用DNAStar对GenBank上公布的金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、鼠伤寒肠道沙门氏菌肠道亚种、变形杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌7种细菌的16SrRNA进行基因序列比对,设计通用引物、通用探针和具有种特异性的寡核苷酸探针,并对反应条件进行优化,确定了通用引物最佳浓度为25μM,金黄色葡萄球菌和福氏志贺菌探针的最佳浓度为50μM,其他5种病原探针的最佳浓度为100μM。建立了PCR-RLB检测方法,针对上述7种细菌的检测敏感性可达到10-610-11 ng/μL,远远高于PCR的10-310-8 ng/μL。3.利用所建立的PCR-RLB方法,对采自兰州市居民区（380只）、屠宰场（330只）、垃圾中转站（200只）及医院附近（150只）的家蝇携带上述7种病原的情况进行了调查,发现居民区的家蝇携带金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、豚鼠气单胞菌、创伤弧菌、鼠伤寒肠道沙门氏菌肠道亚种、变形杆菌、小肠结肠炎耶尔森菌的阳性率分别为0%、33.93%、0%、0%、39.29%、0%和17.86%,屠宰场的家蝇携带这7种病原的阳性率分别为0%、37.50%、0%、0%、35.42%、0%和14.58%,垃圾中转站的家蝇携带这7种病原的阳性率分别为0%、20.00%、0%、0%、43.33%、0%和26.67%,医院附近的家蝇携带这7种病原的阳性率分别为7.14%、32.14%、0%、10.71%、14.29%、3.57%和28.57%,为评估城市蝇类在细菌类疾病传播中的作用提供了初步数据。