研究背景帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是以运动功能障碍为主要特征的中枢神经系统退行性疾病,发病机制为中脑黑质纹状体的多巴胺能神经元减少,最终导致多巴胺不足。研究表明,保护好残存的神经元或逆转受损的神经元是延缓或阻止疾病进程的关键。目前PD的治疗主要以增加脑内多巴胺(dopamine,DA)含量的对症处理为主,长期以来左旋多巴成为PD药物治疗的金标准,但左旋多巴治疗PD随用药时间延长,会出现一系列并发症。因此,寻找真正能够阻止疾病进程的神经保护药物具有重要的意义。研究目的本论文拟深入研究异鼠李素-3-O-葡萄糖苷抑制MPP~+诱导的细胞凋亡的分子机制,同时探讨异鼠李素-3-O-葡萄糖苷对MPTP诱导的帕金森小鼠行为学及多巴胺能神经元细胞凋亡的作用,为帕金森病的治疗提供新的思路。研究方法采用MTT法测定细胞存活率;AnnexinV/PI双染和流式分析法检测细胞凋亡;Western blot检测细胞蛋白表达水平;JC-1荧光探针流式检测线粒体膜电位;激光共聚焦显微镜观察蛋白定位等。研究结果在体外实验中,预处理异鼠李素-3-O-葡萄糖苷后,可以显著抑制1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的细胞色素C的释放,抑制凋亡相关蛋白Caspase 3、Caspase 9的激活以及PARP的降解,从而抑制细胞凋亡。进一步研究发现,异鼠李素-3-O-葡萄糖苷能够通过线粒体凋亡途径抑制MPP~+诱导的细胞线粒体分裂和膜电位下降,同时通过PI3K/AKT信号通路调控细胞凋亡。我们还发现异鼠李素-3-O-葡萄糖苷是通过抑制MPP~+诱导的Drp1 Ser637位点的去磷酸化和Drp1的线粒体转位,而抑制线粒体分裂和细胞凋亡。此外,我们通过体内实验发现,异鼠李素-3-O-葡萄糖苷可以改善MPTP诱导的小鼠行为学,同时减少MPTP诱导的小鼠多巴胺能神经元细胞凋亡,抑制MPTP诱导的多巴胺合成限速蛋白TH免疫反应活性降低。结论1.异鼠李素-3-O-葡萄糖苷通过调节Drp1,干扰Drp1与Bax结合,从而阻断MPP~+诱导的线粒体分裂,进而抑制细胞凋亡。2.异鼠李素-3-O-葡萄糖苷可以抑制MPTP诱导的小鼠损伤。