手足口病是由一组人类肠道病毒引起的急性婴幼儿传染病。最常见病原为人类肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A群16型(CoxA16)。其中EV71型病毒感染是导致严重中枢神经系统并发症和死亡病例的主要原因。EV71型病毒自1974年首次被鉴定命名后,其感染流行遍及全球,引起了多次大大小小的暴发与流行。近年来,EV71感染形势在亚太地区尤其是东南亚地区呈上升趋势,造成了我国台湾地区1998年和2000年发生的两次手足口病疫情以及2008年安徽省阜阳市的手足口病疫情大暴发。近两年来,我国大陆地区的EV71流行情况则愈加严重,学龄前儿童对EV71普遍易感,并且目前尚未有保护性疫苗上市。另外,EV71型病毒的外界生存抵抗能力很强,易在儿童中引起感染流行,EV71型病毒相关性手足口病成为了严重影响儿童健康的公共卫生问题。目前而言,以流行病学监测为基础,对易感人群进行积极的预防工作是目前降低手足口病发病率和死亡率的重要措施。本研究主要针对2010年-2011年上海地区肠道病毒的流行、EV71型病毒的基因进化特征、不同年龄段儿童对EV71的易感性状况和肠道病毒外界生存能力及常用手部消毒剂对EV71灭活效果进行监测和实验研究,主要包括以下五个部分：1、2010-2011年上海地区手足口病病原流行概况的分析,对2010年-2011年上海地区手足口病病原学监测。标本采集的病例统计结果显示：大多数手足口病患者的年龄集中在1-5岁之间,6岁以上儿童及6个月以下婴儿发病率较低,男童病例数高于女童。病原学监测结果显示,2010-2011年轻重症病例标本(共计215份)共分离出104株肠道病毒阳性株,肠道病毒分离率为48.4%(104/215),其中EV71型病毒检出率为64.4%(67/104),CoxA16型病毒检出率为22.1%(23/104)。在轻症病例标本中,2010年EV71型病毒在肠道病毒分离株中所占比例(57.4%)明显高于CoxA16型病毒(19.1%),2011年CoxA16的分离率(36.1%)稍高于2010年的分离率(19.1%),但在肠道病毒属阳性株中,EV71(58.8%)仍然占了更大的比例(58.8%)；比较2010年重症手足口病病例和轻症手足口病病例的病原分离情况,可以看出,分离出的肠道病毒阳性株中,重症病例组的EV71型病毒检出率(87.0%)明显高于轻症病例组(57.4%)。2010年逐月肠道病毒监测的数据显示,儿童肠道病毒感染有一定的季节性,其中,春夏过渡季节(5-7月)直至冬季(11-12月)的肠道病毒分离率一直保持较高水平,并无明显的高峰和低谷时段；2011年逐月肠道病毒监测的数据显示,3月份即开始出现了高肠道病毒分离率。提示上海市手足口病的预防控制的工作重点应放在每年的春季直至秋季。2、2010年上海地区肠道病毒71型分离株VP1区基因特征分析,在2010年全年监测分离出的上海地区EV71病毒株中,选取分离自不同时间的43株EV71病毒株,对它们的抗原决定簇VP1区进行核苷酸序列测定、比对。其中随机选择不同时间段分离自轻症与重症病例EV71分离株VP1区基因序列各9条,与NCBI公布的EV71A、B、C各基因型参考株VP1区序列进行核苷酸及氨基酸序列比对,并构建系统发生树。结果显示,该18株上海地区的EV71分离株与A、B基因型参考病毒株的核苷酸同源性分别为81.5%～82.6%、83.4%～84.2%,氨基酸同源性分别为94.3%-95.0%、96.6%-97.0%,与C基因型比较,核苷酸与氨基酸同源性分别为87.4%-99.2%、98.7%-100.0%。而与2008年安徽省阜阳市的EV71流行株(C4亚型)的核苷酸同源性可达97.8%-99.2%,氨基酸同源性99.3%-100.0%。在系统发生树上,这43株毒株均在C基因型中,与阜阳的C4亚型代表株属于同一分支。对比分离自轻症与重症病例的EV71毒株VP1区基因序列,发现并无明显差异。3、2011年上海地区健康儿童血清EV71中和抗体水平检测,了解上海地区不同年龄、性别儿童对EV71病毒的易感性以及既往感染的免疫保护状况,分析EV71相关性手足口病流行趋势。采用96微孔板中和试验法检测血清中的EV71型病毒中和抗体。结果显示,共检测的93份0-8周岁健康儿童血清中,EV71中和抗体阳性率为58.1%,中和抗体几何平均滴度(GMT)为1：14.48,不同性别儿童的血清中和抗体阳性率与GMT都无显著性差异。而血清EV71中和抗体阳性率及GMT都与儿童年龄关系密切,0-6个月婴儿血清中和抗体阳性率较高,为87.5%,GMT为1：29.56；2-3周岁儿童血清中和抗体仅为3.7%,GMT为1：4.21,均显著低于0-6个月组婴儿；5-6周岁儿童的抗体阳性率大幅度回升,为88.3%,GMT为1：21.74,显著高于2-3周岁组；6-7周岁年龄组儿童的血清中和抗体阳性率为66.7%,GMT为1：20.76,均与5-6周岁组无显著性差异。可看出5周岁以上儿童的EV71既往感染率较高,对EV71感染产生了较稳定免疫力；2-3周岁儿童对EV71病毒高度易感,应该加强预防EV71引起的手足口病在该年龄段儿童中的流行和传播。4、肠道病毒分离株在日常自来水中的生存能力研究,以了解手足口病病原在一般体外环境中的存活情况,推测肠道病毒介水传播的可能潜在危险性。我们在上海及浙江省地区监测病例肠道病毒分离株中选取了5株EV71型病毒,1株Cox群病毒分别污染含氯浓度为1.0mg/L的模拟出厂自来水,采用Vero细胞培养,细胞病变效应(CPE)观察,日监测水中病毒存活情况。最后运用散点图分析自来水中每株病毒存活量对数值下降趋势。结果发现该6株肠道病毒在初始含氯量为1.0mg/L模拟出厂自来水中可以存活一个月以上,病毒株之间存活能力是存在差异的。研究结果显示：EV71型病毒及Cox群病毒在自来水中具有较强的存活能力。在手足口病流行期间,城市、农村及城乡结合部需要注意手足口病病原(肠道病毒)介水传播途径的危险性。5、常用手部消毒剂对肠道病毒71型灭活效果的研究,为选择合理有效的消毒剂阻断手足口病传播途径提供科学依据。采用了悬液定量杀灭病毒的方法进行试验观察。结果显示A类消毒凝胶和B类手部消毒液分别作用1min和5min,对悬液内EV71病毒能达到至少99.9%的灭活效果；C类医用复方手消毒剂作用1min和5min,对悬液内EV71病毒起到至少99.99%的灭活作用；本实验室制备的乙醇甘油消毒液与EV71病毒悬液混合作用lmin则对悬液中EV71病毒有100%的杀灭作用。WHO推荐的乙醇甘油手部消毒液(73%乙醇+3%甘油)对EV71病毒灭活效果好,方便配置而且几乎没有毒性,是一种优良的消毒剂,可以作为预防手足口病等病毒性感染疾病的常规手部消毒剂使用。目前,我们已经在上海地区部分幼儿园和儿童看护所内进行该类消毒剂干预手足口病传播的效果评估。