龙胆总苷（TGG）是中药龙胆的主要活性部位,其中龙胆苦苷（GTP）含量最高,活性最强。龙胆总苷具有保肝利胆、抗炎抗菌等药理活性,其对于急慢性肝病的疗效确切,但由于其口服生物利用度低,限制了口服制剂的开发和药物疗效的发挥。此外,龙胆总苷还具有一定的胃刺激性及稳定性差等缺点。因此,本课题以龙胆总苷为研究对象,以龙胆苦苷为指标性成分,拟通过Caco-2细胞模型阐明龙胆总苷的口服吸收机理,并通过将其制成磷脂复合物（TGG-phytosome）,提高药物口服生物利用度及稳定性。但是,前期研究结果显示,磷脂复合物在水性环境中性质不稳定,易发生解离,考虑将其进一步制成自微乳（TGG-phytosomeSMEDDS）及油溶液,以提高其稳定性,及进一步提高其生物利用度,并制成肠溶软胶囊,以减少药物的胃刺激性。本文还将致力于磷脂复合物及其肠溶软胶囊的制备工艺筛选、稳定性及药动学的研究,并初步探讨磷脂复合物及自微乳给药系统的口服吸收机理,为解决龙胆总苷生物利用度低等问题奠定基础。本论文主要包括以下五部分研究内容:1、龙胆总苷口服小肠吸收机理的研究建立了龙胆苦苷含量的HPLC分析测定方法。为阐明龙胆总苷口服生物利用度低的原因,建立了Caco-2模型,首次考察了TGG的Caco-2细胞摄取及跨膜转运,并且评价表面活性剂Cremophor EL、Labrasol和Transcutol P对药物转运的影响。结果表明:1)GTP的吸收转运是以被动扩散为主,同时受外排蛋白外排的作用。在摄取过程中GTP不受介质pH的影响,但存在温度依赖性,GTP于不同温度细胞摄取行为:4℃细胞摄取量大于37℃细胞摄取量;2)TGG为吸收较差的药物,其表观渗透系数小于10^-6cm/s,且TGG中含有促进GTP转运的其他成分;3)GTP摄取受外排蛋白影响,而TGG中含有与GTP结构类似的成分使P-gp饱和,受P-gp蛋白影响不显著,但是受MRP外排作用较为显著;4)Cremophor EL、Labrasol和Transcutol P能显著地增加TGG吸收,而低浓度的DMSO及大豆磷脂对药物没有促进吸收的作用。综上所述,龙胆总苷口服生物利用度低的原因主要为:TGG的水溶性过强,跨膜性能极差,导致其生物利用度极低。按BCS分类,TGG属于第Ⅲ类药物,即:水溶性强,渗透性能差的药物。2、龙胆总苷磷脂复合物的制备工艺、结构验证及其稳定性研究（1）优化龙胆总苷磷脂复合物的制备工艺。为筛选得到稳定且提高生物利用度效果最佳的磷脂复合物制备工艺,以复合率及水中解离速率为评价指标,分别对磷脂的种类、药脂比例、溶剂的种类、溶剂的用量、搅拌时间、搅拌温度等因素进行考察。并采用大鼠药动学进一步筛选确定药脂比例。结果表明:对磷脂复合物形成影响较大的因素为:磷脂种类、反应溶剂种类及药脂比。本章通过筛选选定磷脂为大豆磷脂,反应溶剂为四氢呋喃,药脂比为1:2,药物浓度为10mg/mL,搅拌温度与时间分别为40℃和4h。（2）通过UV、DSC、X-射线衍射、TLC、IR等方法对龙胆总苷磷脂复合物的结构进行验证。结果表明:将TGG制成磷脂复合物后,其物相发生了改变,并有固定的熔点。因此,可推断龙胆总苷磷脂复合物是药物与磷脂通过氢键结合而成的无定形复合物,而非以共价键结合的新化合物。（3）龙胆总苷磷脂复合物的稳定性研究。考察龙胆总苷磷脂复合物的稳定性影响因素,结果显示:本品应避光、避免高温保存,并严格避免高湿环境中放置,密闭保持。3、龙胆总苷磷脂复合物自微乳化肠溶软胶囊的研究（1）自微乳化给药系统的处方及制备工艺优化。分别测定TGG-phytosome在油相、表面活性剂及助表面活性剂中的溶解度。根据溶解度结果,绘制伪三元相图,通过形成的自微乳区域对油相、表面活性剂及助表面活性剂的种类进行初步的筛选;通过自微乳化效率的评价指标对伪三元相图中能形成自微乳的各处方进行筛选,确定最优处方及制备工艺为:Maisine35-1:Miglycol（1:2）=30%为油相,Labrasol:CremorphorEL（1:4）=40%为表面活性剂,Transcutol P=30%为助表面活性剂组成空白自微乳介质,在空白介质中以1:10（g/g）的比例加入TGG-phytosome,于37℃搅拌1d,放置2d,即得。并将自微乳药液进一步制成肠溶软胶囊,以减少胃刺激性。（2）对筛选所得的TGG-phytosome SMEDDS进行理化性质的考察。自微乳化制剂经蒸馏水稀释后,在透射电镜下为均一的球形乳滴;pH1.0HCl及pH6.8PBS中的粒径分别为（25.2±5.3）nm及（46.7±8.2）nm,呈高斯分布;Zeta电位为（-13.54±6.24）mV。自微乳化药液的粒径在0.1M HCl、蒸馏水及pH 6.8 PBS稀释后,于8小时内均无显著性变化（P＞0.05）,药物没有结晶析出,药液较为稳定。（3）自微乳化肠溶软胶囊稳定性研究。TGG-phytosome SMEDDS可提高磷脂复合物的稳定性,避免磷脂复合物的解离。TGG-phytosome SMEDDS肠溶软胶囊应避光、密闭室温保存。4、龙胆总苷磷脂复合物及自微乳给药系统口服吸收机理探讨首次考察龙胆总苷磷脂复合物及自微乳给药系统口服吸收机理。采用Caco-2细胞模型研究TGG-phytosome及其自微乳对TGG小肠吸收的影响,结果表明TGG-phytosome及TGG-phytosome SMEDDS均显著提高TGG细胞摄取与转运。通过考察自微乳中每种辅料及空白自乳剂对TGG细胞摄取及转运的影响,发现除磷脂以外每种辅料均对TGG的吸收促进作用,但均没有TGG-phytosomeSMEDDS效果显著。因此,可以推断TGG-phytosome与TGG-phytosome SMEDDS协同作用显著提高了TGG生物膜通透性。5、龙胆总苷磷脂复合物及自微乳给药系统药动学研究（1）龙胆总苷磷脂复合物及自微乳给药系统的大鼠药动学研究。建立大鼠血浆中龙胆苦苷HPLC测定方法,研究龙胆总苷、龙胆总苷磷脂复合物混悬液、磷脂复合物油溶液及其自微乳化给药系统给药后在大鼠体内的药代动力学及口服给药的相对生物利用度。结果表明:药物经口服后在大鼠体内药代动力学符合一室模型,且油溶液及SMEDDS具有一定的缓释作用;龙胆总苷磷脂复合物混悬液、油溶液及自微乳的相对生物利用度（Fr）分别为372.65%、749.45%及968.49%。（2）龙胆总苷磷脂复合物及自微乳肠溶软胶囊的Beagle犬药动学研究。建立Beagle犬血浆中龙胆苦苷HPLC测定方法,研究龙胆总苷肠溶硬胶囊、龙胆总苷磷脂复合物油溶液肠溶软胶囊及其自微乳化肠溶软胶囊给药后在Beagle犬体内的药代动力学及口服给药的相对生物利用度。结果表明:口服TGG、TGG-phytosome油溶液及TGG-phytosome SMEDDS肠溶软胶囊均符合一室模型,权重系数为1/C。TGG-phytosome及SMEDDS肠溶软胶囊的相对生物利用度（Fr）分别为506.87%及703.62%,具有缓释的作用,与大鼠生物利用度考察结果一致。因此,将TGG制成磷脂复合物及自微乳给药系统能显著改善其吸收,提高其生物利用度。此外,在Beagle犬药动学试验过程中,发现制成肠溶制剂给药后,Beagle犬无呕吐的现象。因此,肠溶制剂有效地避免了药物对胃的刺激性。