本实验通过改变以下试验条件:卵母细胞体外成熟时间的不同、卵母细胞去核时操作液成分的不同,来研究其对山羊核移植效率的影响,希冀寻找一个有效的核移植方案。1、将山羊卵母细胞经过不同的体外成熟时间后:18 h、22 h、26 h,比较其成熟率发现,经三种成熟时间的卵母细胞成熟率差异不显著。将这三种情况下的卵母细胞去核后,比较其去核率时发现,随卵母细胞成熟时间的延长去核率下降(87.1%, 84.4%, 76.5%)。但是对核移植胚的体外发育情况进行进一步研究发现,18h时的卵裂率(71.8%)明显低于22 h和26 h(81.1%,82.5%);22 h时的囊胚率(19.6%)高于18 h和26 h时的囊胚率(12.5%, 15.7%)。所以,卵母细胞体外成熟时间以22 h左右为宜。2、本研究比较了判断山羊卵母细胞去核效果的指标:将具有第一极体的卵母细胞放入含细胞松弛素B(cytochalasin-B,CCB)浓度分别为5 mg/L、7.5 mg/L、10 mg/L、15 mg/L的操作液中盲吸去核,经荧光染色后检测去核率,再构建重组胚观察重组胚的发育情况;在含7.5 mg/L CCB的操作液中分别再加入质量浓度为2%、2.5%、3%的蔗糖进行去核,再用相同方法确定去核率,再构建重组胚观察重组胚情况。结果:CCB浓度为7.5 mg/L时,去核成功率(84.4%)明显高于对照组(70.7%),也高于其他各组;平均操作时间随CCB浓度的升高而降低;含CCB浓度为7.5 mg/L与5 mg/L的操作液去核卵母细胞所构建的重组胚卵裂率(81.1%、82.4%)显著高于对照组和15 mg/L的卵裂率(69.8%、71.8%);含CCB浓度为7.5 mg/L与5 mg/L的操作液去核卵母细胞所构建的重组胚囊胚率(19.6%、18.8%)显著高于对照组的囊胚率(9.5%)。蔗糖质量浓度为2.5%时的去核成功率(91.4%)明显高于对照组(84.4%);平均操作时间随蔗糖质量浓度的升高而降低。结论:去核时在如下条件下,可以取得最佳去核效率:(1)去核时操作液中CCB浓度7.5mg/L;(2)操作液中蔗糖质量浓度为2.5%。