【摘 要】
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目的:甄别大鼠结肠肌间神经丛（myenteric plexus,MyP）内的去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）能神经纤维的来源,观察不同来源NE能神经纤维在肠壁内的形态特点和分布范围;研究内源性NE能神经纤维和结肠MyP内其他类型神经元之间的联系和超微结构特点;探讨内源性NE能神经元及其纤维联系对肠道运动功能的影响;为进一步阐明内源性NE能神经元的神经解剖学特点和揭示其功能提供理论
【基金项目】
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国家自然科学基金（肠肌间神经丛的去甲肾上腺素能神经元调控肠运动的机制研究,31971112）；
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目的:甄别大鼠结肠肌间神经丛（myenteric plexus,MyP）内的去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）能神经纤维的来源,观察不同来源NE能神经纤维在肠壁内的形态特点和分布范围;研究内源性NE能神经纤维和结肠MyP内其他类型神经元之间的联系和超微结构特点;探讨内源性NE能神经元及其纤维联系对肠道运动功能的影响;为进一步阐明内源性NE能神经元的神经解剖学特点和揭示其功能提供理论基础。方法:正常Sprague Dawley（SD）大鼠30只,8～10周龄,雌雄不拘,体重200～260 g,按随机数字表法分为空白对照（control,C）组、生理盐水（normal saline,NS）组和无水乙醇腹腔神经丛阻滞（neurolytic celiac plexus block,NCPB）组,每组各10只大鼠。C组:对腹腔神经丛不做任何处理;NS组:将0.1 mL NS注射到腹腔神经丛;NCPB组:将0.1 mL无水乙醇注射到腹腔神经丛。存活72 h后,对各组动物均作如下处理:（1）尼氏（Nissl）染色观察腹腔神经节内神经元形态和数量的变化;（2）免疫荧光组织化学染色观察结肠MyP内多巴胺-β-羟化酶（dopamine beta hydroxylase,DBH）阳性NE能神经元和神经纤维的分布;（3）Western blotting检测结肠肌层内DBH蛋白的表达情况;（4）免疫荧光双重染色观察内源性NE神经纤维和MyP内其他类型神经元之间的联系。（5）免疫电镜观察内源性NE能神经元和神经纤维的超微结构特点。另取12只正常SD大鼠,根据给予药物的差异,将其分为肾上腺素能受体激动剂NE组和抑制剂普萘洛尔组,每组各6只。两组分别依次给予10–6～10–3mol/L梯度浓度的两种不同药物,选择NE和普萘洛尔的最适浓度,进行NE和普萘洛尔对肠道运动影响的药理学研究。（6）在离体结肠标本上,取最适浓度的NE和普萘洛尔检测两者对C组、NS组和NCPB组大鼠结肠纵行肌（longitudinal muscle,LM）和环形肌（circular muscle,CM）张力的不同影响。结果:1、成功建立了NCPB大鼠模型,主要表现在:NCPB组大鼠腹腔神经节Nissl染色结果显示部分神经元缺失、结构破坏,Nissl小体溶解或消失、数量明显减少。2、在C组和NS组大鼠MyP的节内可见散在分布的DBH阳性的NE能神经元和神经纤维,在节间纤维束可见呈网状分布且较密集的DBH阳性的NE能神经纤维束;在去除外源性神经支配后,NCPB组大鼠MyP的节内仍可见散在分布的DBH阳性的NE能阳性神经元和神经纤维,这些内源性NE能神经纤维主要分布在DBH阳性的NE能神经元胞体的周围,但节间纤维束内呈网状分布的NE能神经纤维明显减少（P＜0.05）。3、与C组和NS组相比,NCPB组结肠肌层内的DBH蛋白表达量明显减少（P＜0.05）,而C组和NS组结肠肌层内的DBH蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。4、NCPB组大鼠结肠MyP内,部分DBH阳性NE能神经纤维和终末紧密围绕在ChAT、SP、5-HT、NOS、SOM和VIP阳性神经元的周围。5、在超微结构水平观察到DBH免疫反应（immunoreactive,IR）阳性产物分布于胞体和突起内,DBH-IR阳性轴突终末和MyP内其他非DBH-IR神经元的胞体或树突形成密切接触,但其二者之间未见明显的突触结构。6、在离体结肠标本上,当给予肾上腺素能受体激动剂NE的浓度为10–4mol/L和抑制剂普萘洛尔的浓度为10–4mol/L时,可对结肠LM和CM的收缩分别产生强烈且持久的抑制和激动作用（P＜0.05）。在去除外源性神经后的静息状态下,NCPB组大鼠结肠LM和CM的收缩均出现速度加快、振幅增加和收缩张力提高（P＜0.05）的变化。分别给予10–4mol/L的NE和普萘洛尔后,可以分别抑制和增强这些肠肌的运动活动,且NE和普萘洛尔对NCPB组大鼠LM和CM的影响结果与其对C组和NS组大鼠LM和CM的影响基本相同。结论:1、大鼠结肠MyP中存在内源性NE能神经元和神经纤维,内源性NE能神经纤维主要分布在NE能神经元的胞体周围,仅有少量分布在神经节和节间神经束。提示内源性NE能神经纤维和外源性交感神经节后NE能神经纤维共同呈网状分布于结肠壁内,支配肠道平滑肌运动。2、内源性NE能神经元的轴突末梢围绕在MyP内的兴奋性和抑制性神经元周围;NE能神经终末通过串珠状膨体和其他神经元之间形成密切接触,但未见它们之间形成典型的突触结构。提示NE可能主要通过非突触部位释放（volum transmission）的方式实现对其他神经元的影响。3、内源性NE能神经元通过释放NE参与对肠道运动功能的抑制性调控作用。
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