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关于抑郁症的发病机制有多种假说,例如神经递质改变假说、神经内分泌失衡假说、免疫改变假说等,这些假说从不同的侧面对抑郁症的发生和发展做出了相对合理的解释,但是到目前为止,抑郁症的发生机制依然有待进一步研究。近些年研究发现,成年哺乳动物大脑海马区域神经发生减少与抑郁症发生密切相关,因此,促进海马神经元发生被认为是治疗抑郁症的新靶点和新方向。中药甘松具有理气止痛、开郁醒脾的功效。现代药理研究表明,甘松具有镇静、抗抑郁、增强耐缺氧能力等作用。甘松新酮是甘松的主要活性成分之一,前期的预实验证明其有一定的抗抑郁活性,因此,我们拟观察甘松新酮对中枢神经系统的作用及对原代培养的神经细胞增殖的影响,探讨甘松新酮抗实验性抑郁症的作用及其可能的作用机制。1.甘松新酮对中枢神经系统的作用本部分研究为整体动物实验,旨在观察甘松新酮对中枢神经系统的作用,初步探讨甘松新酮是否具有抗抑郁作用。首先通过急性毒性实验观察为药效学研究的剂量提供依据,在此基础上观察了甘松新酮对小鼠自主活动的影响及与对阈下剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用的影响,然后观察了甘松新酮对小鼠悬尾及游泳不动时间的影响。急性毒性实验结果显示,甘松新酮最大给药量为8.07 g.kg-1；自主活动实验结果表明,甘松新酮能降低小鼠自主活动,但此作用无统计学显著差异；阈下剂量戊巴比妥钠小鼠镇静催眠实验表明,甘松新酮与戊巴比妥钠有一定协同作用,但此作用无统计学显著差异；.小鼠悬尾及强迫游泳试验表明,甘松新酮0.800g.kg-1、0.267 g.kg-1、0.160 g.kg-1组的不动时间均显著低于正常对照组(P<0.01)。研究结果提示甘松新酮具有一定的镇静趋势和一定的抗抑郁作用。2.对体外培养神经细胞及缺糖缺氧损伤神经细胞的影响本部分研究为细胞实验,旨在观察甘松新酮对原代培养神经细胞的作用,探讨甘松新酮是否具有促神经细胞增殖活性以及细胞保护作用。研究采用MTT法,首先观察了甘松新酮对原代培养神经细胞的安全剂量范围,在此基础上确定甘松新酮对体外培养神经细胞的合适剂量,然后观察对原代培养神经细胞及缺糖缺氧损伤神经细胞的作用。研究结果表明,除了给药后48h甘松新酮200μmol.L-1组细胞存活率略低于90%外,甘松新酮200μmol.L-1、100μmol.L-1、50μmol.L-1组细胞在不同时间存活率均大于90%；原代培养神经细胞增殖实验表明,给药后不同时间各给药组与正常对照组比较未显示出统计学显著差异,其中给药后24h,甘松新酮100μmol.L-1、甘松新酮50μmol.L-1表现出一定的促神经细胞增殖趋势,给药后48h甘松新酮200μmol.L-1、甘松新酮100μmol.-1、甘松新酮5 0μmol.L-1显示一定的促神经细胞增殖趋势,给药后72h甘松新酮200μmol.L-1、甘松新酮50μmol.L-1显示出一定的促神经细胞增殖趋势；缺糖缺氧实验结果表明,缺糖2h和4h后正常对照组MTT测试的OD值显著高于缺氧缺糖模型组(P<0.01),提示缺氧缺糖对原代培养的神经细胞造成损伤,缺糖2h后甘松新酮300μmol.L-1、甘松新酮2 00μmol.L-1组OD值显著高于缺糖缺氧模型组(P<0.01),缺糖4h后甘松新酮300μmol.L-1、松新酮100μmol.L-1组OD值显著高于缺糖缺氧模型组(P<0.05)。以上结果提示,甘松新酮具有一定的促原代培养神经细胞增殖趋势,具有显著的抗缺糖缺氧损伤作用。3.甘松新酮促神经细胞增殖及抗缺糖缺氧损伤的机制研究本部分研究旨在探讨甘松新酮促神经细胞增殖作用的机制以及cAMP信号通路或MAPK信号通路在其中的作用。研究采用MTT法结合PKA抑制剂(H89)及MEK抑制剂(PD98059)观察甘松新酮对原代培养及缺糖缺氧损伤神经细胞的作用,采用Elisa去测量缺糖缺氧损伤后LDH的释放,采用Western blotting方法观察甘松新酮对cAMP通路关键蛋白PKA和Rap-1及MAPK通路关键蛋白MEK1和ERK1/2的影响。MTT法研究结果表明,甘松新酮引起的OD值的增加能够被H89及PD98059降低,提示甘松新酮的作用能够被H89及PD98059抑制；Elisa研究结果表明,缺糖缺氧能够增加神经细胞释放LDH,提示缺糖缺氧对细胞造成损伤；Western blotting结果表明,甘松新酮能够增加cAMP通路关键蛋白PKA和Rap-1及MAPK通路关键蛋白MEK1和ERK1/2的表达,抑制剂H89及PD98059能够抑制甘松新酮的作用,提示甘松新酮可能通过cAMP通路和/或MAPK通路发挥促神经细胞增殖及抗缺糖缺氧作用。综上所述,甘松新酮具有一定的镇静趋势和抗抑郁作用,能够促进原代培养的神经细胞增殖,能够抗缺糖缺氧损伤,甘松新酮可能通过cAMP通路和/或MAPK通路发挥抗抑郁作用。