重组大肠杆菌生物合成左旋多巴的研究

来源 :无锡轻工业大学 江南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xtljj
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以弗氏柠檬酸菌的染色体DNA为模板,利用PCR技术从中扩增得到含有编码酪氨酸酚解酶基因tpl的DNA片段.将此片段连接到质粒pUC118上,得到重组质粒pTPL,然后转化到受体菌E.coli XL-1-Blue MRF中,通过蓝白斑鉴定挑出阳性菌株.对重组蛋白的分析及酶活的测定表明质粒表达性能良好.从此阳性菌株中提取质粒pTPL并将其转入到E.coli JM109,E.coli DH5α中,比较了三种重组菌的酶活和质粒稳定性,结果表明E.coli JM109(pTPL)的酶活和稳定性最高,此被确定为该论文的研究菌株.通过对摇瓶培养条件的优化,得出摇瓶最适培养条件.通过对L-DOPA合成条件的优化,得出L-DOPA合成的最适反应体系(100mL).对制得的多巴产品进行旋光度、紫外光谱、红外光谱和HPLC分析,结果表明该提取工艺能够获得较高纯度的产品.
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