【摘 要】
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目的:酸性哺乳动物几丁质酶（CHIA）是18个糖苷酶家族成员之一,在各种器官的上皮细胞中表达,可以降解含几丁质的病原体,并参与Th2细胞介导的炎症反应,增强机体对病原体入侵的先天性和适应性免疫力。在胃中,CHIA主要表达在胃黏膜的主细胞,且先前的研究表明CHIA的下调与幽门螺杆菌引起的萎缩性胃炎有关,但是,CHIA在胃癌中的表达和功能尚不清楚。因此,本研究旨在研究CHIA在胃癌（GC）发病中的潜在
【基金项目】
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氯离子/碳酸氢盐转运体Slc26a9对于十二指肠碳酸氢盐分泌调节的机制研究（国家自然科学基金81660098）； Slc26a9基因缺失致使胃粘膜上皮细胞分化及稳态紊乱导致慢性萎缩性胃炎发生发展的分子机制研究（国家自然科学基金81860103）；
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目的:酸性哺乳动物几丁质酶（CHIA）是18个糖苷酶家族成员之一,在各种器官的上皮细胞中表达,可以降解含几丁质的病原体,并参与Th2细胞介导的炎症反应,增强机体对病原体入侵的先天性和适应性免疫力。在胃中,CHIA主要表达在胃黏膜的主细胞,且先前的研究表明CHIA的下调与幽门螺杆菌引起的萎缩性胃炎有关,但是,CHIA在胃癌中的表达和功能尚不清楚。因此,本研究旨在研究CHIA在胃癌（GC）发病中的潜在作用。方法:1)通过IHC检测人胃癌旁组织和胃癌组织中CHIA的表达,并分析CHIA与胃癌患者临床病理学特征及预后的关系;2)使用人正常胃粘膜细胞GES-1和人胃癌细胞株（AGS;KATOIII;7901;MKN-45;BGC-823）来研究CHIA在正常胃粘膜细胞株及胃癌细胞中的表达;3)构建AGS细胞CHIA过表达稳转株和GES-1细胞CHIA沉默稳转株,分别运用RT-q PCR和Western Blot来验证过表达及沉默效率;4)细胞功能学实验检测CHIA过表达和沉默后分别对AGS和GES-1细胞生物学行为的影响;5)运用Western Blot检测AGS细胞过表达CHIA及GES-1细胞沉默CHIA后对Wnt/β-catenin信号通路的影响;6)建立CHIA缺陷型小鼠模型以研究CHIA在胃黏膜病变中的作用。结果:1)CHIA在正常胃中高表达,但在慢性萎缩性胃炎及各种类型的胃癌组织（包括胃高分化腺癌、胃中分化腺癌、胃低分化腺癌及胃印戒细胞癌）中均明显下调。此外,对人正常胃上皮（n=80）,CAG（n=63）和胃癌（n=114）的IHC分析发现,CHIA表达逐渐下降,表明CHIA的下调是正常胃上皮进展为CAG和恶性病理过程的关键事件;2)与临床观察一致,CHIA表达在所有胃癌细胞株中相对于正常的胃上皮细胞GES-1均显着降低,且AGS细胞中表达最低。另外,上调的CHIA可以明显抑制AGS细胞的增殖,促进AGS细胞的凋亡;且下调的CHIA也可以明显促进GES-1细胞的增殖,抑制GES-1细胞的凋亡,但对迁移和侵袭的无明显影响。3)此外,上调的CHIA可以明显抑制胃癌细胞AGS中Wnt-1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达,明显促进GSK-3β、AIF、Endo G的表达。同时,GES-1沉默CHIA细胞后,可发现下调的CHIA可以明显促进GES-1细胞中Wnt-1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达,明显抑制GSK-3β、AIF、Caspase 3的表达;表明CHIA可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞的增殖及凋亡。4)在动物实验中,与野生型小鼠相比,CHIA缺陷型小鼠在7个月时表现出主细胞丧失,并伴有严重的胃黏膜炎症反应,且伴随Mist1、Lgr5和CHIA表达的下调,但在观察期内未发现肿瘤的形成,我们将继续监测组织学变化。结论:CHIA可能通过Wnt/β-catenin信号通路来调节胃癌的发生和发展。因此,CHIA可能是胃癌的新型治疗靶标。
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