【摘 要】
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目的:肾癌是常见的泌尿系统肿瘤,其发生率占全部肿瘤的3%～5%。其最常见的组织学类型是透明细胞肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,cc RCC）。由于LMNA家族基因在cc RCC中的拷贝数变异可达到13.8%,但是其在CCRCC发生发展的作用以及与其他抑癌基因如PBRM1是否相互作用还不清楚。本实验拟探讨LMNA（编码lamin A/C）在cc RCC细胞中
【基金项目】
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国家自然科学基金项目《PBRM1与核纤层成分互作及其在肾癌细胞中的作用和分子机理》,项目编号:31760321； 贵州省科技厅基础研究项目黔科合基础（[2017]1217）； 贵州省科技厅基础研究项目黔科合基础（[2018]1189）；
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目的:肾癌是常见的泌尿系统肿瘤,其发生率占全部肿瘤的3%～5%。其最常见的组织学类型是透明细胞肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,cc RCC）。由于LMNA家族基因在cc RCC中的拷贝数变异可达到13.8%,但是其在CCRCC发生发展的作用以及与其他抑癌基因如PBRM1是否相互作用还不清楚。本实验拟探讨LMNA（编码lamin A/C）在cc RCC细胞中的作用及分子机理,为临床上肾癌的诊断治疗提供有价值的基础资料。方法:在完全培养基RPMI 1640中培养肾癌细胞786-O和SN12C。（1）用si RNA-mate将si RNA转染入786-O/SN12C细胞敲减lamin A/C的表达水平;实验分为三个组:si Control对照组、si LMNA-1处理组、si LMNA-2处理组;（2）利用Western Blot检测敲减LMNA后蛋白质水平的变化;（3）利用q RT-PCR检测敲减LMNA后m RNA水平的变化;（4）采用CCK8法检测敲减LMNA后对细胞增殖的影响;（5）细胞划痕迁移实验及transwell小室迁移实验检测敲减LMNA后对细胞迁移能力的影响;（6）利用RNA-seq进行敲减LMNA后786-O的基因表达谱检测和分析;（7）通过Western Blot检测敲减LMNA对Wnt/β-catenin和AKT信号通路的影响;（8）通过Western Blot检测cc RCC细胞中抑癌基因PBRM1是否对lamin A/C的表达有调控作用;（9）通过荧光素酶实验进一步检测在cc RCC细胞中PBRM1是否为E2F1的靶基因。结果:（1）CCK8实验显示,与对照组相比,敲减LMNA后对肾癌786-O/SN12C细胞的增殖均无明显影响;（2）细胞划痕迁移实验及transwell小室迁移实验显示,与对照组相比,敲减LMNA后抑制了786-O/SN12C细胞的迁移能力（P<0.05）;（3）敲减LMNA后对降低了肾癌786-O/SN12C细胞中的MMP2和MMP9的蛋白质水平;（4）敲减LMNA后对cc RCC细胞中的β-catenin水平没有明显影响,但是降低了AKT和p-AKT的水平;（5）分析lamin A/C敲减后786-O细胞的基因表达谱共检测到89个显著差异表达基因,Lamin A/C调控了真核生物的核糖体生物发生、牛磺酸和低牛磺酸代谢、核糖体、蛋白质输出、甘露糖型O-聚糖生物合成等;（6）Western Blot检测敲减PBRM1后lamin A/C表达升高;（7）PBRM1是E2F1的靶基因,E2F1可以结合在PBBRM1上游的反应元件并抑制PBRM1的表达。结论:（1）敲减LMNA后对肾细胞癌细胞786-O/SN12C的增殖能力均无显著影响,但显著抑制了其迁移能力;（2）LMNA通过PI3K/AKT信号通路而不是Wnt/β-catenin信号通路影响cc RCC细胞的迁移;（3）PBRM1是E2F1的靶基因,E2F1可以结合在PBRM1上游的反应元件并抑制PBRM1的表达。
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