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研究背景与目的：拉帕替尼(lapatinib)是一种针对EGFR和HER-2双靶点的小分子酪氨酸激酶抑制剂,能够可逆性地与受体胞内的酪氨酸磷酸化酶位点相结合,从而抑制受体的磷酸化和激活,阻断下游MAPK和PI3K/AKT等信号通路,诱导细胞周期阻滞和促进细胞凋亡,达到抗肿瘤的作用。目前体外研究已表明拉帕替尼可以诱导细胞G1期阻滞或促进细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,而这种现象的发生可能与细胞周期抑制性蛋白p27Kip1 (p27)的表达是密切相关的,但具体机制仍未明确。本研究旨在观察p27的表达在拉帕替尼诱导乳腺癌细胞周期阻滞中发挥的作用,并初步探讨其表达的分子调控机制。为深入理解p27发挥的生物学作用和其成为拉帕替尼治疗乳腺癌的疗效预测靶标提供依据。方法：本实验选择三株乳腺癌细胞：SK-BR-3细胞、MDA-MB-453细胞(HER-2高表达),MCF-7细胞(HER-2低表达)为研究对象。1.通过MTT、流式细胞术实验,观察拉帕替尼对乳腺癌细胞株的生长及细胞周期分布的影响。2.通过蛋白免疫印迹分析、流式细胞术、基因干涉等实验,靶向沉默p27后检测拉帕替尼对乳腺癌细胞周期分布的影响。3.通过实时定量PCR、荧光素酶报告基因、蛋白免疫印迹等实验,探讨拉帕替尼调控乳腺癌细胞p27表达的分子机制。结果：1.拉帕替尼抑制HER-2高表达乳腺癌细胞的增殖。2.拉帕替尼诱导HER-2高表达乳腺癌细胞G1期阻滞。3.拉帕替尼上调HER-2高表达乳腺癌细胞中p27的表达。4.沉默p27的表达抑制拉帕替尼诱导HER-2高表达乳腺癌细胞G1期阻滞。5.拉帕替尼上调SK-BR-3细胞p27基因启动子的相对活性。6.拉帕替尼上调SK-BR-3细胞p27 mRNA的表达。7.拉帕替尼上调FOXO3a mRNA及蛋白的表达。8.拉帕替尼提高SK-BR-3细胞p27蛋白的稳定性,抑制其降解。9.拉帕替尼上调SK-BR-3细胞p27 Ser10磷酸化的表达,抑制p27 Thrl87磷酸化的表达。10.拉帕替尼上调SK-BR-3细胞DYRK1B的表达。结论：拉帕替尼通过上调HER-2高表达乳腺癌细胞内p27的表达而诱导细胞周期的阻滞,抑制细胞的增殖。研究表明拉帕替尼上调p27表达的机制是通过调节其基因的转录及翻译后蛋白修饰水平来实现的：1.、拉帕替尼上调FOXO3a表达激活p27基因转录；2、拉帕替尼促进DYRK1B的表达,上调p27 Ser10磷酸化的表达水平,导致p27降解减少。