目的: 以肽核酸探针及“RecA蛋白—互补单链DNA探针”生物信号放大系统提高石英谐振式基因传感器阵列检测系统的灵敏度,并探索对临床标本进行直接检测的可行性。 方法: 1.首先利用精细微加工法制作单个石英谐振式传感器,并在其两面光刻出金膜电极,比较了不同电极厚度及直径对基因杂交检测的影响。在此基础上先后构建了拔插式2×5型传感器阵列。并自行开发研制自激式振荡电路、PESA V2.0版频率记录分析软件,将它们与计算机联用以构建石英谐振式基因传感器阵列检测系统。 2.探讨用PNA作为探针与普通的DNA探针相比对压电传感器基因杂交的优越性。用生物素—亲和素法分别将PNA,DNA两种探针固定在基因传感器的金膜表面,分别与完全匹配、一个碱基错配、两个碱基错配的互补靶序列进行杂交,观察两种不同的探针与靶序列反应所引起的频率变化及所用的时间。 3.在传感器阵列表面固定上HBV的bis-PNA探针,利用“RecA蛋白—互补单链DNA探针”与固定的肽核酸(bis-PNA)探针相结合,摸索最适的液相反应条件,以提高压电基因传感器表面的质量负载,从而提高检测的灵敏度。 4.实验后期还探索了利用bis-PNA探针对36例临床大三阳标本和14例阴性血清中抽提的基因组DNA直接进行检测的可行性,并比较了加入“RecA蛋白—互补单链DNA探针”较未加此反应体系时,所引起的质量—频率效应明显。 结果: 1.选择了更有利于传感器在液相中稳定的AT切型石英晶体作为传感器基片,金膜电极厚度在50nm-100nm的范围内最适合于用作基因杂交的检测,电极直径4.0mm时插损较小,对质量负载承受能力强。在此基础上构建的拔插式传感器阵列具有方便、快速、经济等优点。 2.自行研制的自激式振荡电路有非常强的振荡能力,在液相中起振非常容易,其频率稳定度也可达实用要求,同时拔插式传感器可有效提高传感器在液相中频率稳定的