论文部分内容阅读
乙烯响应因子(Ethylene Response Factor, ERF)参与植物的生物胁迫和非生物胁迫的应答,是与植物抗逆应答密切相关的一类转录因子。乙烯和病害都能诱导ERF类转录因子的基因表达,它们多数通过与其下游基因的应答元件GCC-box的相互作用来调节基因表达,进而提高植物的抗性。因此应答元件GCC-box对研究ERF类转录因子的调控作用有着至关重要的意义。我们从栽培葡萄中克隆了2个不同的ERF基因的全长的开放阅读框,命名为VvERF4-2和VvERF2-1;从野生夏葡萄中克隆了1个ERF基因的全长的开放阅读框,命名为VaERF5。本文通过PEG-Ca2+共转化拟南芥原生质体瞬时表达系统,对含有GCC-box的荧光素酶报告基因经过ERF调节后的荧光检测分析,分别对VvERF2-1、VvERF4-2和VaERF5对GCC-box的调控关系进行了研究,目的是探讨ERF转录因子是否通过GCC-box调节其下游的靶基因的表达。研究结果表明:1)拟南芥原生质体分离的最佳条件是:室内土培3-4周的拟南芥,取中部叶片,离心力为40-60 g,制动值(brake)为1-2时的原生质体得率和质量最佳;2) PEG-Ca2+共转化实验发现,当PEG转化液的浓度为40%时,转化后原生质体较圆、破损情况较小;3)选WI培养液培养原生质体要比W5培养效果稳定;4) VvERF2-1与GCC-box共转化不影响luc的荧光检测值;5) VvERF4-2与GCC-box共转化可使luc的荧光检测值增大;6) VaERF5与GCC-box共转化不影响luc的荧光检测值。