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背景：糖尿病心肌病（diabeticcardiomyopathy,DCM）是糖尿病（Diabetesmellitus）主要的心血管并发症之一，独立于高血压、冠心病、心脏瓣膜病及其他心脏病而存在，由糖代谢紊乱引起，以心脏功能和结构障碍为主要病理改变的一种心肌病变，最终可导致心力衰竭。心肌纤维化是糖尿病心肌病的重要病理生理改变，可导致心肌重构，使心肌顺应性降低，是多种心血管疾病向终末期心脏病转化的重要过程。
尿石素A（UrolithinA，UA）主要由富含鞣花单宁的植物（石榴、草莓、核桃、花生等）经体内肠道微生物代谢产生，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤增殖等多种药理作用，且在抗神经损伤、顺铂所致肾损害等方面有积极作用。有研究表明UA能通过诱导自噬而延长线虫的寿命，并通过增强自噬而改善啮齿类动物衰老性肌肉衰退功能。但UA在糖尿病心肌病中的作用尚未见文献报道。DCM发病机制较为复杂，目前尚未被详尽阐明，近年来，越来越多研究证明，自噬在糖尿病心肌病进程中发挥着重要的作用，那UA对糖尿病心肌病是否具有治疗作用、以及其是否通过调节自噬来发挥作用尚不清楚。
目的：本课题通过腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）制备1型糖尿病小鼠模型，体外采用高糖刺激成年大鼠心肌成纤维细胞（Cardiacfibroblats，CFs）构建细胞模型，明确UA在STZ诱导的糖尿病小鼠心肌纤维化的药理作用，并探讨尿石素A是否通过调控自噬发挥抗糖尿病心脏损伤的作用。
方法：①健康雄性C57BL/6小鼠连续6天腹腔注射STZ制备糖尿病小鼠模型，分为正常对照组（CON组）、正常+UA组（CON+UA50mg/kg/d）、模型组（DCM组）、模型+UA组（DCM+UA50mg/kg/d）。UA从糖尿病第4周末开始灌胃给药，连续给药12周，检测体重及血糖变化情况，超声检测心功能指标，HE及Masson染色观察心肌病理切片，Westernblot法检测纤维化相关蛋白CollagenI、FN（Fibronectin）的表达情况。②原代培养成年大鼠心肌成纤维细胞，分别用不同浓度(5.5、20、33、47mM)葡萄糖作用细胞24h、33mmol/L高糖刺激细胞不同时间（1、3、6、12、24、48h）、高糖加不同浓度的UA（10、20、40μM）刺激心肌成纤维细胞24h，MTT比色法检测细胞存活率，Westernblot法检测细胞内纤维化相关蛋白FN、CollagenI的表达水平。③Westernblot法检测UA对糖尿病小鼠心肌及高糖条件下心肌成纤维细胞自噬蛋白LC3、P62的影响，mRFP-GFP-LC3双标腺病毒转染心肌成纤维细胞检测自噬体和自噬溶酶体的变化，细胞分组为：CON、CON+UA20、HG、HG+UA20。④采用自噬溶酶体抑制剂20μmol/L氯喹（Chloroquine，CQ）验证UA是否通过调控自噬改善纤维化，实验分组为：CON、CON+UA20、HG、HG+UA20、HG+UA20+CQ、HG+CQ，Westernblot法检测细胞内纤维化相关蛋白FN、CollagenI及自噬蛋白LC3、P62的表达情况。
结果：①与正常小鼠相比，糖尿病小鼠随机血糖升高、体重减轻、糖耐量降低、心重降低（P＜0.05），UA干预后，对于上述指标并没有明显改善作用；与正常组比较，糖尿病组心脏舒张功能下降，Masson结果显示心肌间质及血管外胶原纤维沉积，Westernblot结果显示纤维化相关蛋白FN、CollagenI表达增加（P＜0.05），UA干预后明显改善心脏舒张功能，胶原沉积减少，纤维化相关蛋白CollagenI、FN表达下降（P＜0.05）。②Westernblot结果显示，不同浓度高糖刺激后，纤维化相关蛋白FN、CollagenI表达均增高（P＜0.05），随着高糖作用时间的延长，纤维化相关蛋白CollagenI、FN表达逐渐增高（P＜0.05）。MTT结果显示UA（80μmol/L）刺激24h后，细胞存活率下降（P＜0.05），UA给药范围选为10-40μmol/L。与HG组相比，HG+UA组FN、CollagenI的表达均随给药浓度的升高而下降（P＜0.05）。③Westernblot结果显示糖尿病小鼠心肌及高糖条件下细胞内自噬蛋白P62堆积、LC3II、LC3II/I比值增加(P＜0.05)，UA进行干预后，自噬蛋白P62堆积减少、LC3II、LC3II/I比值下降(P＜0.05)，GFP-RFP-LC3腺病毒双标荧光结果显示与CON组相比，HG组代表自噬体的黄色荧光增加(P＜0.05)，代表自噬溶酶体的红色荧光无明显变化，HG+UA组减少黄色斑点自噬体的堆积(P＜0.05)，增加红色斑点自噬溶酶体(P＜0.05)；使用CQ后，UA对自噬蛋白LC3II、P62及纤维化相关蛋白FN、CollagenI的作用被逆转。
结论：①尿石素A改善糖尿病小鼠舒张功能障碍，改善糖尿病小鼠心肌纤维化。
②尿石素A可抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化相关蛋白FN、CollagenI的表达。
③尿石素A可通过改善细胞内自噬流障碍发挥抗糖尿病心脏损伤的作用。
尿石素A（UrolithinA，UA）主要由富含鞣花单宁的植物（石榴、草莓、核桃、花生等）经体内肠道微生物代谢产生，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤增殖等多种药理作用，且在抗神经损伤、顺铂所致肾损害等方面有积极作用。有研究表明UA能通过诱导自噬而延长线虫的寿命，并通过增强自噬而改善啮齿类动物衰老性肌肉衰退功能。但UA在糖尿病心肌病中的作用尚未见文献报道。DCM发病机制较为复杂，目前尚未被详尽阐明，近年来，越来越多研究证明，自噬在糖尿病心肌病进程中发挥着重要的作用，那UA对糖尿病心肌病是否具有治疗作用、以及其是否通过调节自噬来发挥作用尚不清楚。
目的：本课题通过腹腔注射链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）制备1型糖尿病小鼠模型，体外采用高糖刺激成年大鼠心肌成纤维细胞（Cardiacfibroblats，CFs）构建细胞模型，明确UA在STZ诱导的糖尿病小鼠心肌纤维化的药理作用，并探讨尿石素A是否通过调控自噬发挥抗糖尿病心脏损伤的作用。
方法：①健康雄性C57BL/6小鼠连续6天腹腔注射STZ制备糖尿病小鼠模型，分为正常对照组（CON组）、正常+UA组（CON+UA50mg/kg/d）、模型组（DCM组）、模型+UA组（DCM+UA50mg/kg/d）。UA从糖尿病第4周末开始灌胃给药，连续给药12周，检测体重及血糖变化情况，超声检测心功能指标，HE及Masson染色观察心肌病理切片，Westernblot法检测纤维化相关蛋白CollagenI、FN（Fibronectin）的表达情况。②原代培养成年大鼠心肌成纤维细胞，分别用不同浓度(5.5、20、33、47mM)葡萄糖作用细胞24h、33mmol/L高糖刺激细胞不同时间（1、3、6、12、24、48h）、高糖加不同浓度的UA（10、20、40μM）刺激心肌成纤维细胞24h，MTT比色法检测细胞存活率，Westernblot法检测细胞内纤维化相关蛋白FN、CollagenI的表达水平。③Westernblot法检测UA对糖尿病小鼠心肌及高糖条件下心肌成纤维细胞自噬蛋白LC3、P62的影响，mRFP-GFP-LC3双标腺病毒转染心肌成纤维细胞检测自噬体和自噬溶酶体的变化，细胞分组为：CON、CON+UA20、HG、HG+UA20。④采用自噬溶酶体抑制剂20μmol/L氯喹（Chloroquine，CQ）验证UA是否通过调控自噬改善纤维化，实验分组为：CON、CON+UA20、HG、HG+UA20、HG+UA20+CQ、HG+CQ，Westernblot法检测细胞内纤维化相关蛋白FN、CollagenI及自噬蛋白LC3、P62的表达情况。
结果：①与正常小鼠相比，糖尿病小鼠随机血糖升高、体重减轻、糖耐量降低、心重降低（P＜0.05），UA干预后，对于上述指标并没有明显改善作用；与正常组比较，糖尿病组心脏舒张功能下降，Masson结果显示心肌间质及血管外胶原纤维沉积，Westernblot结果显示纤维化相关蛋白FN、CollagenI表达增加（P＜0.05），UA干预后明显改善心脏舒张功能，胶原沉积减少，纤维化相关蛋白CollagenI、FN表达下降（P＜0.05）。②Westernblot结果显示，不同浓度高糖刺激后，纤维化相关蛋白FN、CollagenI表达均增高（P＜0.05），随着高糖作用时间的延长，纤维化相关蛋白CollagenI、FN表达逐渐增高（P＜0.05）。MTT结果显示UA（80μmol/L）刺激24h后，细胞存活率下降（P＜0.05），UA给药范围选为10-40μmol/L。与HG组相比，HG+UA组FN、CollagenI的表达均随给药浓度的升高而下降（P＜0.05）。③Westernblot结果显示糖尿病小鼠心肌及高糖条件下细胞内自噬蛋白P62堆积、LC3II、LC3II/I比值增加(P＜0.05)，UA进行干预后，自噬蛋白P62堆积减少、LC3II、LC3II/I比值下降(P＜0.05)，GFP-RFP-LC3腺病毒双标荧光结果显示与CON组相比，HG组代表自噬体的黄色荧光增加(P＜0.05)，代表自噬溶酶体的红色荧光无明显变化，HG+UA组减少黄色斑点自噬体的堆积(P＜0.05)，增加红色斑点自噬溶酶体(P＜0.05)；使用CQ后，UA对自噬蛋白LC3II、P62及纤维化相关蛋白FN、CollagenI的作用被逆转。
结论：①尿石素A改善糖尿病小鼠舒张功能障碍，改善糖尿病小鼠心肌纤维化。
②尿石素A可抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化相关蛋白FN、CollagenI的表达。
③尿石素A可通过改善细胞内自噬流障碍发挥抗糖尿病心脏损伤的作用。