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目的：构建携带小鼠血管生成素-1(Angiopoietin-1, Ang-1)基因的慢病毒载体并对重组载体进行鉴定,为进一步研究通过Ang-1基因疗法治疗BPD提供实验基础。方法：(])以pcDNA-Ang-1为模板,采用聚合酶链反应扩增前后端带有attB重组位点的Ang-1全长序列；(2)利用Gateway技术通过BP反应构建入门克隆pDown-Ang-1；(3)应用PCR及基因测序对入门克隆进行鉴定；(4)通过LR反应将pDown-Ang-1与质粒pUp-CMV、pDown-Ang-1、pTail-IRES/DsRed-Express2和母载体PLV. Des3d.P/puro进行重组反应,构建携带DsRed荧光蛋白的Ang-1慢病毒表达载体PLV. Ex3d.P/puro-CMV>Ang-1>IRES/DsRed-Express2;(5)应用PCR及基因测序对表达载体进行鉴定；(6)将PLV.Ex3d.P/puro-CMV>Ang-1>IRES/DsRed-Express2与辅助质粒(pLV/helper-SL3、pLV/helper-SLA及pLV/helper-SL5)采用脂质体法共同转染293FT细胞进行慢病毒的包装,产生相应的慢病毒颗粒,通过荧光表达情况来测定病毒滴度和感染效率。结果：PCR及基因测序证实,通过BP反应成功构建了入门克隆pDown-Ang-1,通过LR反应成功构建了Ang-1慢病毒表达载体PLV. Ex3d.P/puro-CMV>Ang-1> IRES/DsRed-Express2,慢病毒表达载体全长序列10621bps, CMV启动子序列1950bp-2538bp, Ang-1开放阅读框架序列2569bp-4065bp, IRES序列4080bp-4677bp, DsRed-Express2序列4678bp-5355bpo与辅助质粒(pLV/helper-SL3、 pLV/helper-SL4及pLV/helper-SL5)采用脂质体法共同转染293FT细胞后细胞内可见荧光的表达,且包装出具高效感染力的慢病毒,根据荧光表达情况测定病毒滴度为5×108TU/ml。结论：应用Gateway技术成功构建了Ang-1慢病毒表达载体PLV.Ex3d.P/puro-CMV>Ang-1>IRES/DsRed-Express2,并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒,为进一步研究通过Ang-1基因疗法治疗BPD提供了实验基础。