论文部分内容阅读
桃红四物汤原名加味四物汤，载于《医垒元戎》，录自《玉机微义》，是在四物汤的基础上加桃仁、红花而成，是活血化瘀之代表方。桃红四物汤在临床上应用广泛，近年的研究表明桃红四物汤具有调控病理性血管生成的作用。慢性肝损伤伴肝纤维化发展过程中存在明显的病理性血管生成与重构，阻碍了肝纤维化的逆转与恢复。通过桃红四物汤对病理性血管生成作用的研究，发现部分活血化瘀中药具有抑制病理性血管生成的作用，抗病理性血管生成可能是活血化瘀药的现代药理作用之一。因而从整体水平研究桃红四物汤对慢性肝损伤伴早期肝纤维化小鼠的治疗作用及作用机理可以为临床慢性肝损伤及早期肝纤维化的治疗提供实验依据。 目的:从整体水平研究复方桃红四物汤(Tao-Hong-Si-Wu Decoction,THSWD)对四氯化碳所致慢性肝损伤伴肝纤维化模型小鼠肝组织病理结构的变化、肝功能相关生化指标、血清中透明质酸和层粘连蛋白的含量、肝组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、含激酶插入区受体(kinase insert domain containing receptor, KDR)及Flt-1蛋白与mRNA表达的影响。 方法:昆明种小鼠60只，随机数字法分组为空白组、模型组、秋水仙碱对照组、桃红四物汤高中低(17.00g/kg、8.50g/kg、4.25g/kg)剂量组，采用左侧腹股沟处皮下注射四氯化碳花生油溶液建立小鼠慢性肝损伤伴纤维化模型;给药6周后，摘眼球取血，提取血清进行肝功能相关指标检测，固定肝组织，制作病理切片;并运用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)肝组织VEGF蛋白含量;蛋白印迹法(Westem blotting)测定小鼠肝脏AKT、pAKT、KDR和Flt-1蛋白的表达;逆转录PCR(reverse transcriptionpolymerase chain reaction, RT-PCR)法测定小鼠肝组织VEGF、KDR、Flt-1及AKT mRNA表达。 结果: 1.通过组织病理学观测和血清学检测，THSWD中药复方组及秋水仙碱组病理切片与模型组相比，肝组织病变明显较轻，肝小叶结构轻度紊乱，仅在少数区域见不完整的假小叶形成。肝细胞脂肪变性较轻，散在少量点状坏死。肝窦扩张不明显，汇管区稍扩大，仅见少量炎细胞浸润，纤维组织轻度增生，部分视野可见少量细纤维隔。肝脏慢性坏死性炎症及肝纤维化程度较模型组相对较轻。中药组与模型组相比肝功能相关生化指标有不同程度的降低。 2.经THSWD治疗后，中药复方高、中剂量组肝组织VEGF蛋白表达量较模型组降低(P＜0.05或P＜0.01)，复方高、中剂量组及西药秋水仙碱组AKT蛋白表达量明显低于模型组(P＜0.01)。西药秋水仙碱组及THSWD高剂量组pAKT蛋白表达量明显低于模型组(P＜0.01或P＜0.05)。中药高剂量组肝组织KDR与Flt-1蛋白表达较模型组降低(P＜0.05)，低剂量组较之无差异;而THSWD高中剂量组肝组织VEGF、KDR及Flt-1 mRNA表达较模型组、秋水仙碱组明显减少(P＜0.01)，并且呈现一定的量效正相关性。THSWD高剂量组与模型组相比AKT mRNA表达降低(P＜0.05）。 结论:THSWD能够改善小鼠肝功能，减轻肝脏炎性坏死及抑制肝纤维化的发展;THSWD能够降低慢性肝损伤后肝脏病理血管生成相关因子的表达，减缓病理性微血管生成可能是其治疗肝损伤延缓肝纤维化的机制之一。