背景及目的:血-脊髓屏障(blood spinal cord barrier, BSCB)的破坏将严重扰乱脊髓内环境稳态，是脊髓损伤(SCI)创后难愈的重要原因。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)，是一个具有神经保护作用的营养因子，有助于神经元细胞的存活，在多种中枢神经系统疾病中显示出积极作用。前期研究表明bFGF有助于大鼠SCI后后肢运动功能的恢复，但其对BSCB是否具有维护作用，仍无报道。小窝蛋白-1(Caveolin-1，Cav-1)，参与形成胞膜窖的结构蛋白，是细胞微囊的标志蛋白，在血管屏障通透性的调控中发挥着重要作用。本文旨在研究并阐述外源性bFGF是否有利于SCI后BSCB完整性的维护，并确定在BSCB破坏后bFGF与Cav-1之间的关系。　　方法:(1)大鼠SCI模型的建立:本实验采用脊髓打击器HI-0400构建损伤模型。暴露脊柱T8～10段，撞击T9节段，撞击器直径为2.5 mm，打击器力度大小为150 kdy，无停留时间。撞击后，剔除力度大小异常或超出10％以上的。将雌性SD大鼠随机分为模型组、bFGF给药组以及假手术组，手术结束后半小时，在背部损伤周围皮下给bFGF(80μg/kg)，之后每隔一天给药一次，并在损伤后1、3、7、14d对大鼠进行行为学评分。血脊髓屏障的通透性采用尾静脉注射伊文思蓝、FITC-dextran检测。在相应时间点处死大鼠，收集组织标本分用于冰冻切片染色、Western blot、明胶酶谱、PCR以及其他检测。本实验主要涉及的指标有粘附连接蛋白(p120-catenin，β-catenin)、紧密连接蛋白（occludin，claudin-5）、Cav-1、MMPs等。　　(2)内皮细胞糖氧剥夺(OGD)模型的建立:当单层培养的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)达到融合时，换成饥饿培养基培养饥饿过夜，然后更换无糖的基础培养基，移至氧浓度为0.2％的培养箱中培养12 h，取出后检测细胞通透性或收集蛋白进行相关指标检测。bFGF溶于PBS中，给药浓度50 ng/mL、OGD前30 min进行处理，正常组加同体积的PBS。检测指标与体内实验相同。　　(3)小干染RNA转染HBMEC:为进一步研究Cav-1与BSCB的关系及bFGF可能的作用机制，我们在体外HBMEC上进行Cav-1的敲除。当HBMEC生长至70％，按照lipofectamine2000试剂盒步骤进行转染，加入5μL lipofectamine2000,100 pmole si-Cav-1。24 h后，进行OGD实验（步骤同上）。检测HBMEC对FITC-dextran的渗透率，并采用Western blot和免疫荧光技术检测连接相关蛋白的表达。　　结果:(1)首先验证bFGF对脊髓撞击后的神经保护作用，从1、3、5、7、14d的Basso，Beattie and Bresnahan(BBB)评分以及14 d的脚步印迹结果，我们可以得出，bFGF能够促进SCI后大鼠后肢运动功能的恢复。HE及NeuN的染色结果进一步证实bFGF可以减少大鼠SCI造成的核固缩、组织出血、神经元丢失等损伤。然后，从不同时间点的伊文思蓝的渗漏结果得出，SCI后BSCB被破坏，且在手术后第一天伊文思蓝的渗漏量最多，同时，我们发现bFGF在损伤后第一天对屏障的保护作用最强;FITC-dextran检测进一步验证bFGF的作用;WB及免疫荧光染色结果表明bFGF提高SCI后粘附连接蛋白(pl20-catenin、β-catenin)和紧密连接蛋白(claudin-5、occludin)的表达，减少巨噬细胞CD68的表达;明胶酶谱、WB及PCR实验结果表明bFGF降低SCI后MMP-9的表达及活性。体外OGD实验结果表明，OGD后细胞间通透性显著上升，FITC-dextran渗透量增加，紧密连接相关蛋白表达减少，而bFGF可以促进细胞紧密连接相关蛋白的上调，减少FITC-dextran的渗透。　　(2)在上述结果的基础上，为了探索bFGF是如何保护BSCB的，我们检测关键因子Cav-1的表达。结果显示，SCI后，Cav-1的表达呈现出与连接蛋白相一致的趋势，且bFGF在提高连接相关蛋白表达的同时也提高了Cav-1的表达。因此，我们推测Cav-1参与bFGF修复血脊髓屏障的过程。从Cav-1与其他细胞标志物的双染结果，我们发现Cav-1仅在脊髓的血管中表达。随后，我们在体外内皮细胞实验引入Cav-1的小干扰RNA。结果表明，当敲低内皮细胞Cav-1的表达后，bFGF对连接相关蛋白和内皮屏障通透性的保护作用消失。　　结论:bFGF能够提高大鼠SCI和OGD后紧密连接蛋白和粘附连接蛋白的表达，降低MMP-9的表达及活性，从而促进BSCB的修复，并且Cav-1在bFGF修复BSCB完整性中至关重要。