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背景乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一,在发达国家和中国的上海、北京等大城市中,乳腺癌已位列女性癌症发病率首位。全球每年乳腺癌发病人数超过120万,死亡约30万,严重威胁广大妇女健康。近年来在肿瘤免疫方面的一大突破是研究人员检测到肿瘤患者血液及瘤体组织中调节性T细胞(Regulatory T Cell, Treg)的数量明显高于正常人,揭示了肿瘤微环境的免疫抑制性本质。Treg细胞已由一个正常机体的保护者变节成了癌肿的免疫屏障,导致杀伤细胞(CD8+T细胞等)无力清除肿瘤细胞。因此,靶向Treg细胞的疗法已成为肿瘤免疫治疗的重要研究方向。目前对Treg的不同亚型的分类研究层出不穷,但目前尚不清楚其具体“分工”以及是否具有除目前发现之外的功能。Valmori等人报道了成年人外周血中Treg亚型的鉴定与功能分析,确定了CD4+CD25+CCR7+CD62L+CTLA-4+Foxp3+CD45RA+/RO"幼稚亚型Treg的存在。Nabila seddiki等人进一步报道了幼稚型Treg的存在与功能,幼稚型CD45RA+调节性T细胞与记忆型调节性T细胞在外周血、淋巴结、脾脏中的存在,并且幼稚型CD45RA亚型表达CTLA-4、转录因子Foxp3、T-bet以及GATA3,而且具有免疫抑制活性。此外,文献报道,nTreg细胞在转录因子启动子区的甲基化程度与未分化的幼稚型T细胞(naive T cell)非常接近。实验目的1.验证幼稚型Treg细胞是否存在于肿瘤患者体内,且随着肿瘤发生发展产生数量相应变化。2.明确在手术、化疗治疗过程中,患者外周血中幼稚型Treg细胞与肿瘤负荷状态的相关性。方法本研究收集20名健康志愿者和70例早期乳腺癌患者的血样和新鲜肿瘤组织标本。所有患者均接受手术治疗和术后辅助化疗。健康人体检时,患者术前、术后和每周期化疗前后采集外周静脉血,分离得到外周血单个核细胞。通过B超引导穿刺活检或乳腺癌手术获取乳腺癌患者肿瘤原位组织,通过原代培养技术获取肿瘤浸润淋巴细胞。利用幼稚型T细胞的表型标记：CD45RA和CD62L,通过免疫荧光抗体染色技术,最终经过流式细胞仪分析得到CD4+CD25highCD45RA+或CD4+CD25highCD62L+两种幼稚型Treg在健康人外周血,患者肿瘤原位、手术前后和辅助化疗期间外周血中占淋巴细胞的比例变化。同时探究不同乳腺癌患者的不同临床表型对其外周血幼稚型Treg细胞数目的差异影响。结果1.乳腺癌患者外周血CD45RA和CD62L两种幼稚型Treg比例明显高于健康人的比例。2.乳腺癌患者肿瘤原位的CD45RA和CD62L两种幼稚型Treg均明显高于患者外周血中幼稚亚型的比例。3.乳腺癌患者手术后CD45RA幼稚型Treg比例较术前明显降低。4.在术后辅助化疗期间CD45RA和CD62L两种幼稚型Treg均下降,在化疗早期的疗程中下降明显,在最后几个疗程中保持在相对稳定水平。5.临床分期较晚的患者CD45RA和CD62L两种幼稚型Treg比例均比临床分期早的患者高；而Her-2型分子分型的患者两种幼稚型Treg比例较Luminal A、 Luminal B分子分型的患者高；Ki-67水平高的患者者CD45RA和CD62L两种幼稚型Treg的比例均比Ki-67的患者高。结论：1.幼稚型的Treg细胞存在于肿瘤患者体内,无论在肿瘤原位还是外周血均高于健康人,而且肿瘤患者肿瘤原位幼稚型的Treg明显高于外周血。2.随着手术后肿瘤负荷的消失,患者外周血中CD45RA+幼稚型Treg细胞下降。化疗治疗中患者外周血中幼稚型Treg细胞下降,尤其在化疗前2、3个周期时下降明显。3.两种幼稚型Treg比例并与患者的不同临床特点均存在相关性,Ki-67水平高的患者CD62L+幼稚型Treg比例高于Ki-67水平低的患者。