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目的:通过蛋白质组学研究探索氢气对高氧肺损伤中肺泡II型上皮细胞的保护机制。方法:将早产鼠原代AECII体外培养24h后,分为常氧组、高氧组和高氧+氢气治疗组,将常氧组置于常氧(氧体积分数为0.21),高氧组和高氧+氢气治疗组置于氧舱(氧体积分数为0.95)中培养24小时,高氧+氢气治疗组在通高氧时置于富氢培养基中培养。倒置相差显微镜观察各组细胞形态学改变,CCK-8试剂检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白BAX,Bcl-2,AECI标志物AQP5、T1α的水平,免疫荧光检测AECII标志物SPC的表达情况,以保证高氧损伤模型和氢气保护模型的成功建立,收集建模成功的AECII的总蛋白,采用TMT标记定量蛋白组技术检测其蛋白谱的变化情况,并进行生物信息学分析。结果:光镜下观察可见常氧组细胞明显增殖、延展,胞浆颗粒物质丰富,高氧组可见胞核固缩,胞浆内颗粒物质明显减少,加入氢气干预后,细胞形态明显改善;与常氧组相比,高氧组细胞蛋白BAX、SPC表达量明显增加,而蛋白Bcl-2、AQP5和T1α表达量明显降低,细胞活性明显降低,凋亡增加,分化能力降低;当加入氢气干预后,AECII细胞蛋白BAX、SPC表达量明显减少,而蛋白Bcl-2、AQP5和T1α表达量明显增加,细胞活增加,凋亡减轻,分化能力增强。(2)蛋白质组学共鉴定出蛋白5782种,其中高氧暴露后差异表达的蛋白共162种,加入氢气干预后,差异表达的蛋白共97种,其中29种蛋白既在高氧暴露后差异表达也在氢气干预后差异表达,通过GO分析、KEGG富集分析和PPI分析鉴定出大量可能参与氢气的保护机制相关的蛋白分子、生物过程及通路,包括VEGFA、PDGFB、IGFBP3、EDN1蛋白,NADPH氧化酶参与的ROS生成过程,以及凝血级联反应等通路。结论:氢气对高氧肺损伤中肺泡II型上皮细胞的保护作用需要多种蛋白、生物过程的参与,VEGFA、PDGFB、IGFBP3、EDN1蛋白,NADPH氧化酶参与的ROS生成过程,以及凝血级联反应等可能在其中起着重要的作用。