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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)是一种常见的食源性致病菌,容易造成人的食物中毒和感染。自抗生素在畜牧业上广泛使用以来,细菌的耐药性不断增强,越来越多的动物源性食品检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcus aureus,MRSA)。这就增加了多重耐药的危险,使得人类和动物疾病的预防和治疗更加困难,并且易引发公共卫生问题。而且金黄色葡萄球菌容易形成生物膜,附着在食品管道或者其他介质上,不易清除,造成食品的污染。因此,对于食源性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性和生物膜及其潜在危害的研究已成为食品安全领域的热点。本研究主要调查了34株MRSA的耐药性及生物膜形成能力,其中12株源于猪鼻腔,4株源于原料牛乳,6株源于鸡肉,6株源于即食食品,6株源于饺子。利用琼脂稀释法测定MRSA菌株耐药性,刚果红法和96孔板法分别定性和定量检测MRSA菌株的生物膜形成能力,并利用PCR技术对MRSA菌株的耐药基因和生物膜形成基因进行了检测,明确食品和动物性食品中MRSA的耐药性和生物膜形成能力及二者之间可能存在的相关性,为食品的安全评估提供理论依据。本研究主要结果如下:(1)MRSA菌株的耐药性较为普遍,对甲氧苄啶/磺胺甲恶唑和红霉素的耐药率最高,其次是头孢西丁和庆大霉素,对其他种类的抗生素如β-内酰胺类抗生素,四环素,氨基糖苷类等抗生素也都存在一定程度的耐药,所有的MRSA菌株均对万古霉素敏感。不同地区来源的MRSA菌株对抗生素的耐药趋势基本相同,不同食品中MRSA菌株耐药性存在显著性差异,即食食品和饺子中的耐药性相对较低。(2)耐药谱广,研究中多数MRSA耐六种以上的抗生素,主要是β-内酰胺类抗生素,磺胺类,四环素,氨基糖苷类,红霉素类等多种不同类型抗生素,其中AMP-CEFOX-OXA-CHLO-TET-AMC-GEN-SXT-ERY耐药型最为常见。(3)耐药基因的检测率很高,blaZ的阳性率最高,为94.1%。除氨基糖苷类药物外,MRSA菌株对其他药物的耐药基因型和耐药性均存在显著性差异。(4)MRSA菌株对头孢西丁和苯唑西林的耐药性并不是完全一致,头孢西丁的耐药率高于苯唑西林。菌株内源mecA编码青霉素结合蛋白PBP2a和blaZ基因编码β-内酰胺酶是MRSA分离株对β-内酰胺酶类药物耐受的主要原因。(5)本研究中采用刚果红定性检测MRSA分离株的生物膜形成能力,发现除即食食品中一株显阴性外,其他分离株均为生物膜阳性菌株。96孔板定量检测所有分离株均具生物膜形成能力,生物膜形成能力弱的菌株最多,其次是形成能力中等的菌株和强等级的菌株。MRSA菌株的生物膜形成能力与耐药性之间存在一定的相关性,这表现在MRSA分离株对红霉素,头孢西丁,四环素,氯霉素,庆大霉素,阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林的耐药性在生物膜形成能力弱等级,中等等级和强等级中存在显著性差异(P<0.05)。(6)不同食品及动物源MRSA菌株的生物膜形成能力及生物膜相关基因的检测率存在显著性差异(P<0.05)。本研究发现调控MRSA生物膜形成的基因检测率普遍较低, agr,sar和sigB检测率分别为17.6%,5.9%,2.9%。并非所有的生物膜阳性菌株都含有icaADBC基因,其中50%的菌株含有icaBC,32.4%的菌株中含有icaAD。MRSA菌株中MSCRAMMs基因簇中检测率最高的为eno和clfA (均97.1%),其次为clfB(91.2%), fib (82.4%), ebps (58.8%), fnbB (35.3%), cna (14.7%), fnbA (8.8%)和bbp (2.9%)。