猪附红细胞体抗原分析及间接ELISA检测方法的建立

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hqxt2009
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为了解猪附红细胞体的抗原特性,本研究建立了三种解离猪附红细胞体的方法,将解离下的猪附红细胞体经超声波裂解制备成体抗原,经Sephadex G-200分离提纯后,应用对流免疫电泳(CIEP)定位特异性抗原蛋白峰,再应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western blotting)对猪附红细胞体的粗提及纯化的体抗原进行了分析;并且对提取的猪附红细胞体体外培养液中的分泌抗原进行了分析,与体抗原进行了比较。结果表明,猪附红细胞体的体抗原有四条蛋白带,其分子量分别为77kD、62kD、58kD、29kD,其中特异性抗原分子量为58kD和29kD;而分泌抗原仅出现一条蛋白带,与体抗原中的29kD蛋白带大小相同,并具有较好的反应原性。说明猪附红细胞体的体抗原和分泌抗原中均含有反应原性较好的抗原蛋白。 为进一步完善猪附红细胞体的血清学诊断技术,本研究应用提纯抗原建立了检测猪附红细胞体抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原浓度为5μg/ml、被检血清稀释度为1:160、酶标二抗稀释度为1:4000为最佳工作浓度。该方法不与猪肺炎支原体、猪瘟、猪弓形虫等病阳性血清发生交叉反应,具有较好的特异性;该方法与IHA平行检测118份猪血清样本,结果表明,比IHA试验敏感性高19.5%,并且ELISA检测IHA为阳性的符合率为100%。说明间接ELISA具有敏感、特异、稳定等优点,适用于猪附红细胞体抗体的检测。
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