鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是东南亚地区及我国南方各省常见的一种恶性肿瘤，其发生不仅有明显的地域性和家族集聚现象，而且存在基因组不稳定的特性。细胞和分子遗传学研究发现，鼻咽癌基因组存在高频率3p、9p、11q、13q和14q染色体的等位基因的杂合性丢失。我室采用cDNA代表性差异分析的方法克隆了一个新基因BRD7，Genbank登录号为AF152604。 我室近期研究显示，该基因在鼻咽癌细胞和组织中表达明显下调，在BRD7基因的编码区发现了3个cSNP。采用酵母双杂交系统(Two-hybrid system)筛选出与6种BRD7蛋白相互作用的蛋白，包括：溴区包含蛋白3(Bromodomain-containing 3 protein，BRD3)、溴区包含蛋白2(Bromodomain-containing 2 protein，BRD2)、β-IkB激酶(IkB kinase-beta)、KIAA1375蛋白(KIAA1375 protein)、白介素7(interleukin 7，IL-7)和接头相关蛋白复合物3 δ-1亚单位(adaptor-related protein complex 3，delta 1 subunit)。这些都说明BRD7可能是一个与鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因。本研究拟进一步研究BRD7的功能，阐述其在鼻咽癌发生发展中的作用。 通过生物信息学分析，我们发现BRD-7的溴区蛋白与五个结构已知的溴区蛋白具有高度同源性，这些已知的溴区蛋白具有如下特征：含有四个α螺旋(Z，A，B，C)，螺旋与螺旋之间通过环连接(ZA loop，BC loop)，并且含有一个由疏水氨基酸形成的“口袋”，通过这个结构，彭聪 硕士学位论文9能特异性识别乙酚化的组蛋白。这表明BRD7 可能具有与以上bromodomain蛋白相似的结构。另外，我们采用数字化杂交显示该基因在脑、肺、肝、肾、前列腺、骨骼肌、胎盘等正常组织表达较高。这与我们采用实验室方法得出的结果具有较高的一致性。 我们在构建BRD7的真核表达载体BRD7小CDNA3．1卜）基础上，通过脂质体转染方法，将 BRD7基因导入 NPC细胞株 HNE细胞中，并以HN’EI细胞为对照，通过 RTPCR和 Northern Blot方法检测 BRD7基因的表达水平，挑选出BRD7基因高表达的细胞克隆为研究对象，探讨BRD7基因在鼻咽癌发生、发展中的可能作用。 为了证实 BRD7基因对 HNE恶性表型的影响，我们采用重表达BRD7基因的HNEI细胞株，运用细胞生长曲线、软琼脂糖集落形成实验、裸鼠体内接种实验进行生物学行为的研究。结果显示，pCDNA3．l卜＊BRD7／HNEI细胞的生长速度明显减慢，倍增时间延长，软琼脂中集落形成率较对照组显著下降b狈．05入 裸鼠体内成瘤的时间较对照组明显延长，瘤体的大小较HNE和p cDNA3．1卜）空载体转染组明显减小，将3组肿瘤进行病理切片，均为中、低分化鳞癌，无组间差异，显示BRD7基因对裸鼠移植瘤生长具有抑制作用。以上表明，BRD7基因重表达有助于HNEI细胞恶性表型的部分逆转。 为了研究BRD7基因对NPC细胞的作用机制，我们采用流式细胞仪结合细胞周期素的分析方法。结果显示重表达BRD7基因后，能更多的将细胞阻滞于G厂G；期，降低细胞周期素eyel inDI、B表达。以上结果说明BRD7可能通过下调cyclinDI，B的表达，阻滞细胞于G厂Gl期，从而抑制NPC细胞的过度增殖。 综上所述，BRD7基因作为一个重要的鼻咽癌抑瘤基因侯选者，在鼻咽癌细胞中的过表达后，可导致鼻咽癌细胞 HNE蛋白质表达谱发生改变，逆转其恶性表型，其作用机理可能是：BRD7基因通过其功能域彭聪 硕士学位论文10Bromodomain与乙酚化的组蛋白特异性结合，参于染色体的乙酚化，染色质的组装，从而影响基因转录的调控，最终影响细胞内的信号传导通路并实现对细胞周期的调控，从而发挥抑制鼻咽癌细胞生长的作用。