AtU2AF65b通过ABI5和FLC pre-mRNA的剪接参与拟南芥ABA介导的开花时间调控

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在哺乳动物和酵母中,剪接因子U2AF65/Mud2p在pre-mRNA加工过程中发挥作用。拟南芥AtU2AF65b编码U2AF65的同源蛋白,但是对其功能还不了解。我们以在长日照和短日照条件下开花时间明显提前的拟南芥atu2af65b突变体为研究对象,发现拟南芥AtU2AF65b通过FLC和ABI5 pre-mRNA的剪接参与ABA介导的开花时间调控。其主要结果为:(1)AtU2AF65b通过成花诱导过程中的关键抑制因子FLC调控拟南芥开花时间。atu2af65b幼苗茎尖中FLC的mRNA丰度降低,atu2af65b突变体中超表达FLC能够互补atu2af65b突变体的早花表型,atu2af65b flc双突变体的开花时间与atu2af65b没有显著差异,说明atu2af65b突变体中FLC的mRNA丰度降低引起早花。(2)AtU2AF65b通过参与FLC的pre-mRNA剪接调控拟南芥开花。通过检测FLC内含子剪接与未剪接RNA的水平(剪接效率),发现atu2af65b突变体幼苗茎尖中FLC pre-mRNA的剪接效率显著低于atu2af65b突变体恢复株系和野生型拟南芥。(3)AtU2AF65b通过参与ABI5的pre-mRNA剪接调控FLC的转录激活。ABI5是FLC基因表达的调控因子。我们的结果显示atu2af65b突变体幼苗茎尖中ABI5的mRNA水平和剪接效率显著低于atu2af65b突变体恢复株系和野生型拟南芥。atu2af65b中超表达ABI5能够互补atu2af65b突变体的早花表型,atu2af65b abi5双突变体的开花时间与atu2af65b没有显著差异,说明atu2af65b突变体中ABI5的mRNA丰度降低引起突变体早花。(4)AtU2AF65b的表达水平受内源和外源ABA的调控。ABA处理后,基因表达水平检测和GUS组织化学染色分析结果显示,拟南芥幼苗中AtU2AF65b的表达显著升高。ABA信号途径中ABA合成缺失突变体aba1、aba2和nced3以及ABA代谢缺失突变体cyp707a3幼苗中AtU2AF65b的表达水平升高。(5)土壤根施ABA后野生型拟南芥和atu2af65b恢复株系开花时间提前,但atu2af65b开花时间没有明显改变,说明AtU2AF65b参与ABA介导的开花时间调控。(6)土壤根施ABA后atu2af65b茎尖中FLC和ABI5 pre-mRNA剪接效率变化明显比野生型和突变体互补株系低,说明AtU2AF65b可以通过FLC和ABI5 pre-mRNA的剪接参与ABA介导的开花时间调控。
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