目前已经克隆出两种雌激素受体，ERα与ERβ。在人类前列腺组织中，可同时表达ERα和ERβ这两种受体。ERβ在正常前列腺中表达水平较高，主要分布于前列腺上皮细胞。研究表明：与正常前列腺组织相比，前列腺癌组织中的ERβ表达减少或缺失，且ERβ的丢失与前列腺癌的发生、发展紧密相关。ERβ表达缺失的研究有助于说明ERβ对于前列腺具有潜在的保护性作用。基因敲除鼠的长期实验发现，ERβ基因敲除鼠（ERβ-/-），可出现前列腺上皮细胞显著增生，而ERα基因敲除鼠（ERα-/-）未见此种情况，提示，ERβ对于前列腺上皮增生具有抑制作用。此外，研究显示：ERβ在前列腺癌细胞中具有抗增殖和促凋亡的作用，ERβ转染前列腺癌细胞能够抑制细胞的增殖，诱导细胞凋亡，并且ERβ转染其他恶性肿瘤如结肠癌、乳腺癌、卵巢癌等细胞同样能够抑制细胞的增殖，诱导细胞凋亡。因此ERβ在肿瘤发生与发展中的作用具有重要重要的研究价值。我们前期的工作，已通过基因重组技术构建出携带ERβ的pcDNA3.1-ERβ质粒，将其转染至人激素非依赖性前列腺癌PC-3M和PC-3细胞中，结果显示：ERβ能够抑制细胞的增殖、侵袭，诱导细胞发生凋亡，同时发现ERβ能够抑制促生存通路中Akt(蛋白激酶B)的表达。目前研究表明，Akt在前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠癌等肿瘤中处于活化状态。Akt在细胞中以去磷酸化状态存在，磷酸化后可向细胞质或细胞核转运，与底物蛋白作用，活化其下游靶基因，促进肿瘤细胞生长、血管生成、侵袭和转移，抑制细胞凋亡。本实验通过构建裸鼠前列腺原位移植癌模型，利用减毒沙门氏菌携带pcDNA3.1-ERβ质粒到小鼠前列腺肿瘤组织内，体内实验观察ERβ对前列腺原位移植癌凋亡的影响。实验目的：建立裸鼠前列腺原位移植癌模型，应用减毒沙门氏菌携带pcDNA3.1-ERβ质粒，观察ERβ对裸鼠前列腺原位移植癌凋亡的影响。实验方法：构建裸鼠前列腺原位移植癌模型，原位移植术后随机分组：MOCK组给予PBS；PQ组给予减毒沙门氏菌；pcDNA3.1组给予减毒沙门氏菌携带pcDNA3.1空质粒；pcDNA3.1-ERβ组给予减毒沙门氏菌携带pcDNA3.1-ERβ质粒。原位移植手术三天后采用滴鼻给药方式，分别给予相应的10μl PBS及10μl含1×107个菌的各组菌液，第十天后第二次给菌，方式剂量同第一次给菌。观察裸鼠状态及肿瘤的生长情况。待对照组肿瘤长到一定大小时处死全部动物，收集肿瘤样本，AnnexinⅤ和TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡。免疫组化法检测PCNA蛋白的表达水平。Western blot检测ERβ，p-Akt，Bad/Bcl-xl，cleaved caspase9，cleaved caspase3，cleaved PARP的蛋白表达。PCR检测Akt，Bcl-xl，caspase3基因表达。实验结果：与对照组相比，pcDNA3.1-ERβ组裸鼠恶病质程度明显较低，肿瘤重量减轻，肿瘤生长受到抑制。AnnexinⅤ和TUNEL检测结果发现pcDNA3.1-ERβ组肿瘤细胞出现凋亡细胞。免疫组织化学结果可见pcDNA3.1-ERβ组PCNA蛋白表达下降。Western blot实验显示，与MOCK组，PQ组，pcDNA3.1组相比，pcDNA3.1-ERβ组ERβ，Bad/Bcl-xl，cleaved caspase9，cleaved caspase3及cleavedPARP的蛋白表达上调；而p-Akt的蛋白表达下降。PCR结果显示，与MOCK组，PQ组，pcDNA3.1组相比，pcDNA3.1-ERβ组Akt, Bcl-xl，caspase3基因表达下降。结论：ERβ能够诱导前列腺原位移植癌细胞的凋亡，表明ERβ与前列腺癌发生密切相关；其诱导凋亡的机制是ERβ抑制了Akt的活性，从而解除了Akt对其下游靶基因Bad的抑制，促凋亡蛋白Bad的活性增加和/或抗凋亡蛋白Bcl-xl减少，激活caspase9和caspase3的级联反应，诱导前列腺癌细胞凋亡。