米埔红树林根系土壤微生物次级代谢产物对植物致病真菌活性的研究

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鉴于红树林微生物及其次级代谢产物的多样性与新颖性,实验室在香港米埔红树林自然保护区采集了土壤样本,本实验对这些土壤样本进行了深入的研究。本实验对老鼠簕根系土壤样本通过稀释平板法分离纯化得到了多种微生物,基于16S rRNA对分离得到的菌株进行了鉴定工作,经过与相关数据库序列信息的比对后,我们将菌株序列中相似度最高的菌属名的相关的分类信息进行了统计归类,建立了一个包含113株细菌的土壤样本菌库,用于后续研究。同时本实验对红树林样本中出现的两株新菌XY-J53~T和XY-223~T进行了新菌鉴定工作,该部分实验尚在进行中。到现在为止,鲜有红树林天然产物对农业病害防治领域的研究,因此,本次实验我们首先用乙酸乙酯(EA)萃取菌株发酵液获得了菌株的乙酸乙酯粗提物(EA粗浸膏),用以研究这些细菌次级代谢产物。然后我们筛选了113株菌的粗浸膏对四种植物病原真菌的抑制活性。发现了20株有明显抑制真菌生长活性的细菌。在50μg/mL浓度下,这些活性EA粗浸膏对梨果实和水稻植株的炭疽病和稻瘟病有明显的抑制作用。14种抗菌活性较好的粗提物中,有10种对小球藻的毒性与对照组无显著性差异(25-1μg/mL),而在相同浓度下,阿米妙收和代森锰锌对小球藻的杀灭率均为34%。这些数据说明了红树林根际细菌的次级代谢产物在未来农业应用中的潜力。然后从活性菌株中对挑选了一株具有广谱抗真菌活性的链霉菌L75,通过大规模发酵(20 L),富集了7 g的有抑制番茄早疫病菌活性的EA粗浸膏,L75EA粗浸膏在25μg/ml或更低的浓度下,对番茄叶片和根系的生长抑制作用显著优于代森锰锌,对番茄叶片和根系的发育没有明显的负面影响。此外,在相同浓度下,L75 EA粗浸膏的水生毒性明显低于代森锰锌。L75EA粗浸膏的抑制番茄早疫病的作用机理是抑制萌芽管的延伸。对分生孢子的萌发没有影响。液相色谱和质谱仪分析确定了粗浸膏组分中两种已知的抗真菌化合物可能是Alteramide A和HSAF(Heat-Stable Antifungal Factor)。在离体番茄叶片上,在接种了番茄早疫病菌的离体番茄叶片上,涂布50、25和5μg/mL的L75EA粗浸膏,5天后,与对照相比,分别减少了98%、90%和48%的病患区域面积。这进一步印证了红树根际细菌天然产物在农业应用中的潜力。最后,我们从所有样本菌库中随机挑选115株菌,进行PGPR(Plant Growth Promote Rhizobacteria)性状的筛选,本次实验共筛选了4种性状,发现有63株菌对至少一种PGPR性状呈阳性。对红树林菌株样本产生促进植物生长性状的情况进行了初步的了解。随后,对唯一一株四种性状呈阳性的菌株GP3A2进行了活体植物促生实验,其发酵液对植物体促进生长的效果并不明显,有待进一步探索。
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