木聚糖酶在造纸制浆、食品、纺织、饲料、能源等工业中具有广阔的应用前景,但在实际应用中,不同行业领域对木聚糖酶的酶学性质有不同的要求。因此用克隆等生物技术获得既能满足应用条件又能高效表达的木聚糖酶的菌株有着重要的研究和应用价值。本论文研究内容为重组毕赤酵母工程菌HB148n3的发酵产酶、木聚糖酶在纸浆助漂中的作用以及重组毕赤酵母菌的重构,为木聚糖酶的工业生产和在制浆造纸工艺中的应用打下基础。　　 主要的研究内容和结果如下:　　 1.重组毕赤酵母工程菌HB148n3的发酵产酶。用250 mL摇瓶发酵制备木聚糖酶的粗酶液,并初步研究不同温度、pH对木聚糖酶酶活的影响。利用该重组毕赤酵母工程菌进行30 L罐的高密度发酵,获得了每毫升2012 U的酶活,并在此基础上放大培养,进行5吨罐的高密度发酵,获得了每毫升3757 U的酶活,初步确定发酵过程中菌株生长、产酶的各工艺参数。　　 2.木聚糖酶在纸浆助漂中的作用。将发酵制得的酶液稀释,用15 U对1克绝干浆的用量在50℃的条件下处理木苇浆和麦草浆15 min,再用6％的有效氯用量漂白纸浆。检测结果表明木苇浆和麦草浆的纸张性能均有所改善。其中木苇浆的白度增加了3.03％ISO,裂断长增加了0.62 Km、撕裂指数增加了0.93 mN.m2/g,耐折度影响不大;麦草浆的白度增加了2.85％ISO、耐折度增加了2.63次、撕裂指数增加了1.31 mN.m2/g、裂断长影响不大。　　 3.重组毕赤酵母菌的重构。本部分实验利用毕赤酵母表达载体pPICZaA和宿主菌KM71H重构赤酵母菌株。表达载体pPICZαA以Zeocinr作为选择标记,大小为3.6 Kb,较pPIC9K(9.0 Kb)小,更容易转化;毕赤酵母菌KM71H为Muts型,较Mut+型的GS115来说,虽然利用甲醇的速率较慢,但有更高表达量的潜力。本实验成功构建了新的重组毕赤酵母菌株,并表达出了木聚糖酶,为后续筛选出高效表达的重组菌株打下基础。